[发明专利]检测杂色曲霉毒素的时间分辨荧光免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测杂色曲霉毒素的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测杂色曲霉毒素的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、杂色曲霉毒素标准品、杂色曲霉毒素的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测杂色曲霉毒素的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测杂色曲霉毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

背景技术

杂色曲霉毒素（ST）是致癌性真菌毒素之一。其毒性虽弱于黄曲霉毒素，但由于主要的产毒菌杂色曲霉、构巢曲霉等在食品饲料中分布广，产毒比例高，故对人、畜、家禽的危害不容忽视。杂色曲霉素(Sterigmatocystin)主要是杂色曲霉(Aspergillus versicolor)和构巢曲霉(Aspergillus nidulans)的最终代谢产物，同时又是黄曲霉(Aspergillusflavus)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus Speare)合成黄血霉毒素过程后期的中间产物。据报道，感染了杂色曲霉的玉米在27℃的环境下，21天可产生杂色曲霉毒素12g/kg以上。杂色曲霉毒素的大鼠经口LD 50以mg/kg体重计，雄性为166、雌性为120，小鼠为800以上。猴经腹腔注射LDso为32。由LDso值可看出，灵长类(猴)对杂色曲霉毒素的敏感性比啮齿类高。杂色曲霉毒素引起的致死性病变主要为肝、肾实质器官坏死。杂色曲霉毒素具有致癌性，还可使枯草杆菌及小鼠细胞发生突变反应。ST在自然界中广泛存在，因结构与黄曲霉毒素相似，因此其毒性和致癌性受到世界各国的高度重视。

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对杂色曲霉毒素检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种蔬菜水果中杂色曲霉毒素残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测蔬菜水果中杂色曲霉毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测农作物中杂色曲霉毒素残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测杂色曲霉毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、杂色曲霉毒素标准品溶液、抗杂色曲霉毒素的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。

本发明目的之二是这样实现的：检测杂色曲霉毒素的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理及检测，其关键在于：

(1) 免疫原的制备：将半抗原杂色曲霉毒素与牛血清白蛋白（BSA）偶联，得到免疫原（杂色曲霉毒素-BSA）；

(2) 包被原的制备：将半抗原杂色曲霉毒素与卵血清白蛋白（OVA）偶联，得到包被原（杂色曲霉毒素-OVA）；

(3) 单克隆抗体的制备：

a. 用步骤(1)的免疫原（杂色曲霉毒素-BSA）免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗杂色曲霉毒素的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

b. 以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗杂色曲霉毒素的单克隆抗体IgG；

c. 用步骤(2)的包被原包被96孔包被板；

(4) 样品的前处理及检测：