[发明专利]人类RCN3-SSU72基因融合突变检测引物组合、探针及检测试剂盒的使用方法

说明书

本发明公开了提供一种人类RCN3‑SSU72基因融合突变检测引物组合、探针及检测试剂盒的使用方法，本发明采用特异性引物识别人类RCN3‑SSU72基因融合突变类型，基于Taqman探针法收集荧光信号，特异性得到很好的保障。本发明的试剂盒具有以下优点：（1）建立了实时荧光PCR体系，可同时检测RCN3‑SSU72融合突变；（2）操作简单、检测速度快，整个逆转录PCR及荧光PCR检测，半天内即可完成；（3）准确性高，本发明体系中引入UNG酶‑dUTP防污染体系及空白对照体系，能更好地防止假阳性结果，确保检测结果准确可靠。

技术领域

本发明涉及生物技术及医学领域，特别涉及一种人类RCN3-SSU72基因融合突变检测引物组合、探针及检测试剂盒的使用方法。

背景技术

融合基因（Fusion gene）属于基因突变的一种，是指两个基因的全部或一部分序列相互融合形成一个新的基因，最常见的三种发生机制是染色体易位、中间缺失和染色体倒位。大多数情况下，融合基因可能导致异常序列或异常功能的蛋白质的产生，或者某些基因表达的失调，从而导致或者促进肿瘤的发生。基因融合首次发现于血液系统的恶性肿瘤中，其中以慢性粒细胞白血病中BCR-ABL的基因融合最为经典，治疗慢性粒细胞白血病的药伊马替尼/格列卫，其作用靶点就是该融合基因。随着检测技术的发展，科学家陆续在肺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、尤文肉瘤、滑膜肉瘤等实体瘤中发现大量融合基因的存在，且研究表明，融合基因作为肿瘤驱动基因，在肿瘤的诊断、预后、分层、治疗以及药物研发中具有重要意义。

以ALK融合基因为例，ALK融合是非小细胞肺癌（NSCLC）的关键驱动机制之一，在NSCLC患者中的发生概率约为4%-7%。针对ALK融合的抑制剂克挫替尼和色瑞替尼在治疗ALK融合阳性的NSCLC患者中都取得了巨大成功。因此，对融合基因进行准确检测无论是对药物研发还是对精准医疗都具有重要意义。

目前，临床上检测融合基因突变的方法主要是传统PCR方法和直接测序法。还没有准确高效的方法可以临床上来检测人类RCN3-SSU72基因融合突变。传统PCR方法的局限性也很大程度上制约了准确结果的发现，无法系统全面的解析RCN3-SSU72基因融合点。在人肿瘤组织的基因组中含有大量突变，这会导致PCR检测失败。即使使用全基因组检测技术（WGS），RCN3-SSU72融合的检测灵敏度也较低，二代测序技术受限于测序读长较短、分析难度大等，很容易出现假阴性结果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人类RCN3-SSU72基因融合突变检测引物组合、探针及检测试剂盒的使用方法。

本发明采用的技术方案是：

人类RCN3-SSU72基因融合突变检测引物组合、探针，其特征在于：所述引物组合包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的序列，分别如下：RCN3-SSU72 Left Primer：5’-TCTGTTGCTACTGAGGCACG -3’（SEQ ID NO:1）；RCN3-SSU72 Right Primer：5’-GCTCGTCGATCTCGTTCTCC -3’（SEQ ID NO:2），所述与引物组合配合使用的特异性探针序列如SEQ ID NO:3所示，如下：RCN3-SSU72-P ：5’-CCCGTCTGGGCTATACACAG -3’（SEQ ID NO:3），其5’端修饰有FAM或VIC，3’端修饰有NFQ-MGB。

所述试剂盒含有权利要求1所述的引物组合与特异性探针。