[发明专利]一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基在审
申请号: | 201911395681.5 | 申请日: | 2019-12-30 |
公开(公告)号: | CN110923204A | 公开(公告)日: | 2020-03-27 |
发明(设计)人: | 李从宾 | 申请(专利权)人: | 烟台知兴知识产权咨询服务有限公司 |
主分类号: | C12N5/0775 | 分类号: | C12N5/0775 |
代理公司: | 烟台双联专利事务所(普通合伙) 37225 | 代理人: | 牟晓丹 |
地址: | 264000 山东省烟*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 脂肪 干细胞 骨关节炎 治疗 诱导 分化 培养基 | ||
1.一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:该培养基由以下原料制成:蛋白胨10%-15%、碳酸钙8%-15%、氯化钠3%-8%、葡萄糖15%-25%、亚油酸1%-3%、氨基酸3%-5%、维生素2%-6%、蛋白水解物20%-30%、植物多糖10%-25%和蒸馏水20%-30%。
2.根据所述权利要求1的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述培养基的制备方法包括如下步骤:
S1、按照质量百分比称量各原料,备用;
S2、将氯化钠、葡萄糖、亚油酸、氨基酸、维生素、蛋白水解物和植物多糖加入到蒸馏水中,在20转每分钟至30转每分钟速率下,均匀搅拌15分钟至25分钟,充分溶解,得到混合溶液;
S3、将碳酸钙加入到混合溶液中,均匀搅拌,调节pH值至7.2-7.6,得到碱性溶液;
S4、将碱性溶液加热至95摄氏度至98摄氏度,持续保温20分钟至30分钟,进行杀菌处理,得到净化溶液;
S5、将净化溶液冷却至室温状态,加入蛋白胨,调节浓度至含水量为75%-80%,得到粘稠原料;
S6、将粘稠原料至于冷冻环境下,冷冻2小时至4小时,得到胶冻状态原料;
S7、将胶东状态原料分割到培养皿中,覆盖保鲜膜保存,即可得到所述培养基。
3.根据所述权利要求2的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述S3步骤投入碳酸钙为间歇投放方式,即为投放溶解-检测-投放-检测。
4.根据所述权利要求2的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述S5步骤的冷却方式为自然冷却或通风冷却的一种。
5.根据所述权利要求1的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述植物多糖包括黄芪多糖、柴胡多糖、艾叶多糖、茯苓多糖、香菇多糖、红枣多糖、银耳多糖的一种或多种混合物。
6.根据所述权利要求1的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述蛋白水解物的制备方法包括如下步骤:
P1、称量蛋白粉溶解到蒸馏水中,配置含量为25%-30%的蛋白粉溶液;
P2、将蛋白粉溶液中加入碳酸钙,调节pH至8-8.5;
P3、在蛋白粉溶液中加入蛋白酶,混合均匀,进行酶解处理;
P4、将酶解处理后的溶液采用离心机进行离心处理,收集上清液;
P5、将上清液进行过滤,得到蛋白粉水解液;
P6、将蛋白粉水解进行真空冷冻干燥,即可得到蛋白水解物。
7.根据所述权利要求6的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述P3步骤的蛋白酶包括碱性蛋白酶和中性蛋白酶,且比例为1:2-3。
8.根据所述权利要求6的一种人源脂肪干细胞对骨关节炎治疗的诱导分化培养基,其特征在于:所述P4步骤的离心力为800克至900克,持续时间为25分钟至30分钟。
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