[发明专利]血清型单核增生李斯特菌特异性新分子靶标及其快速检测方法

说明书

发明提供了一组用于鉴别常见血清型单核增生李斯特菌特异性新分子检测靶标，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～13所示。所述靶标能鉴别不同型别的单核增生李斯特菌，例如谱系型Ⅰ、谱系型Ⅱ、谱系型Ⅲ、血清组Ⅰ.1、血清组Ⅰ.2、血清组Ⅱ.1、血清组Ⅱ.2、血清型4a、血清型4c。本发明还提供常见血清型单核增生李斯特菌的检测方法，该方法针对所述13个特异靶标分子设计特异性引物，对PCR扩增产物进行电泳，通过电泳结果直接判定检测样本中是否含有常见的血清型单核增生李斯特菌。

技术领域

本发明属于微生物检验技术领域，涉及鉴别常见血清型单核增生李斯特菌新特异性分子靶标。

背景技术

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes，LM)是一种重要的食源性致病菌，WHO将其列为四大食源性病原菌之一，该菌可引起严重的李斯特菌病，如脑膜炎、败血症、心内膜炎、脓肿和局部的脓性损伤等，敏感人群主要有孕妇、婴儿、老人和免疫力低下的人群，致死率为20％-30％。据美国CDC数据显示，每年因李斯特菌引起的疾病约有1600例，死亡约260例(https://www.cdc.gov/listeria/)。我国部分城市有报道偶发李斯特菌病病例，主要人群为孕妇、新生儿等，对我国居民的身心健康造成一定的威胁。作为重要的食源性致病菌，如何鉴定和防控单核细胞增生李斯特菌污染食品是降低单核细胞增生李斯特菌感染的关键之一。

单核细胞增生李斯特菌遗传多样性丰富，具有13种血清型，分别为1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4c、4ab、4d、4e和7型。根据分子特征和进化关系，又可将单核细胞增生李斯特菌分为四个进化家族，谱系型Ⅰ包括1/2a、1/2c、3a、3c，主要分布于食品和自然环境中；谱系型Ⅱ包括1/2b、3b、4b、4d、4e、4ab和7型，可引起人类李斯特菌病的散发和暴发；谱系型Ⅲ和Ⅳ包括4a、4c和部分4b非典型菌株，主要来自动物李斯特菌病和动物食品。单核细胞增生李斯特菌菌株致病力强弱与血清型直接相关，其中1/2a、1/2b和4b血清型是引起人类李斯特菌病的主要血清型。血清玻片凝集法是单核增生李斯特菌血清分型的“金标准”，但存在不足之处，如诊断血清质量要求高，成本昂贵，且如果血清凝集反应迟缓或特异性差，将造成错误的判断结果。以PCR为主的分子生物学检测方法以其快速、准确、简便的特点，逐渐成为取代传统血清分型方法最具潜力的检测技术之一。

目前国内外PCR检测方法大部分是对单核增生李斯特菌进行检测，针对血清型的PCR检测靶标及引物的研究报道仅有单核增生李斯特菌谱系型Ⅰ特异性基因lmo0737；单核增生李斯特菌谱系型Ⅱ特异性基因ORF2819；单核增生李斯特菌血清组Ⅰ.2特异性基因lmo1118；单核增生李斯特菌血清组Ⅱ.2特异性基因ORF2110；单核增生李斯特菌血清型1/2a特异性基因LMOSLCC5850_0077、LMOSLCC5850_0078、hsdS。而针对其他谱系型、血清组和血清型的PCR检测靶标及引物的研究报道几乎没有，因此，也没有有关其他谱系型、血清组和血清型检测的PCR方法建立的报道。

经对现有技术的检索，尚未发现与本发明的13个单核增生李斯特菌常见血清型特异性新分子靶标及相应的PCR检测方法报道。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供用于鉴别常见血清型单核增生李斯特菌，即单核增生李斯特菌谱系型Ⅰ(1/2a-3a-1/2c-3c)、谱系型Ⅱ(1/2b-3b-7-4b-4d-4e-4ab)、谱系型Ⅲ(4a-4c)、血清组I.1(1/2a-3a)、血清组Ⅰ.2(1/2c-3c)、血清组Ⅱ.1(4b-4d-4e-4ab)、血清组Ⅱ.2(1/2b-3b-7)、血清型4a、血清型4c的特异性新分子靶标及相应的PCR检测方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案来实现：

一组用于检测血清型单核增生李斯特菌的分子靶标，所述分子靶标包括如SEQ IDNO.1～13所示的核苷酸序列。