[发明专利]细菌转位子组分蛋白及其截短体的表达和应用

权利要求书

1. 一种截短体蛋白HrpF_536-802，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2. 一种多核苷酸，其编码权利要求1所述的截短体蛋白HrpF_536-802，所述多核苷酸的序列如SEQ ID NO.3所示。

3.包含权利要求2所述的多核苷酸的重组表达载体、转基因细胞系或基因工程菌。

4.一种表达权利要求1所述的截短体蛋白HrpF_536-802的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将SEQ ID NO.3所示的多核苷酸连接到表达载体上，得到重组质粒；然后将重组质粒转入大肠杆菌，得到阳性重组菌株；

（2）将阳性重组菌株在LB液体培养基中振荡培养过夜，然后转接到含有卡那霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养2-3h；然后加入终浓度为0.1mM的IPTG，37℃诱导培养2-3h；将诱导培养后的菌液离心，收集菌体，洗涤，重悬于磷酸缓冲液中，得到菌体悬浮液；向菌体悬浮液中加入终浓度为100μg/ml的溶菌酶和终浓度为0.1mM的蛋白酶抑制剂，超声波破碎，离心取上清，即为粗提蛋白；对粗提蛋白进行纯化，即得。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述表达载体为pET30a(+)。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述蛋白酶抑制剂为PMSF。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，采用Ni-NTA Agarose对粗提蛋白进行纯化。

8.如下1）或2）所述的蛋白在促进植物生长、增加植物产量和/或提高植物抗病性中的应用；

1）氨基酸序列是SEQ ID NO.4所示的蛋白；

2）在SEQ ID NO.4所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；

所述植物为番茄、花生或小麦。

9.如下1）或2）所述的蛋白在促进植物生长或增加植物产量中的应用；

1）氨基酸序列是SEQ ID NO.2所示的蛋白；

2）在SEQ ID NO.2所示的蛋白的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白；

所述植物为番茄、花生或小麦。

10.如下a）或b)所述的DNA片段在促进植物生长或增加植物产量中的应用；

a）SEQ ID NO.1所示的DNA片段；

b）除a)以外编码SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的DNA片段；

所述植物为番茄、花生或小麦。

11.如下a）或b)所述的DNA片段在促进植物生长、增加植物产量和/或提高植物抗病性中的应用；

a）SEQ ID NO.3所示的DNA片段；

b）除a)以外编码SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的DNA片段；

所述植物为番茄、花生或小麦。

12.权利要求3所述的重组表达载体、转基因细胞系或基因工程菌在促进植物生长、增加植物产量和/或提高植物抗病性中的应用；

所述植物为番茄、花生或小麦。

13.一种促进植物生长、增加作物产量和/或提高作物抗病性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将SEQ ID NO.4所示的蛋白配制成浓度为30-50μg/ml的蛋白溶液，在播种之前采用所述蛋白溶液对植物种子进行浸种处理；

或者，将SEQ ID NO.4所示的蛋白配制成浓度为30-50μg/ml的蛋白溶液，在作物生长期采用所述蛋白溶液进行喷雾处理；

所述植物为番茄、花生或小麦。