[发明专利]一种基于纳米磁颗粒数量和状态变化的磁弛豫时间传感器检测农药残留的方法

权利要求书

1.一种基于纳米磁颗粒数量和状态变化的磁弛豫时间传感器对农药残留进行检测的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将待测农药与载体蛋白偶联，然后再与羧基磁珠反应，得到偶联有待测农药完全抗原的磁珠；

2）将识别待测农药的单克隆抗体与二苯基环辛炔-四聚乙二醇-活泼酯反应，得到二苯基环辛炔修饰的单克隆抗体；

3）将偶联待测农药完全抗原的磁珠和二苯基环辛炔修饰的单克隆抗体加入到待测样品溶液中，发生免疫竞争反应，磁分离后得到的“磁珠-完全抗原-抗体-二苯基环辛炔”的免疫复合物；

4）将15-叠氮基-4,7,10,13-四氧十五烷酸-N-琥珀酰亚胺基酯与氨基纳米磁颗粒反应，得到叠氮标记的纳米磁颗粒，将产物磁分离后用PBS缓冲液重悬，然后加入到步骤3）得到的“磁珠-完全抗原-抗体-二苯基环辛炔”免疫复合物中，叠氮与二苯基环辛炔发生生物正交反应，从而叠氮标记的纳米磁颗粒偶联到磁珠上，磁分离后收集上清液，上清液中叠氮标记的纳米磁颗粒数量发生改变；

5）向步骤4）磁分离后的上清液中加入叠氮化物交联剂，触发生物正交反应，将原来分散状态的叠氮-纳米磁颗粒变为聚集状态，使磁免疫传感器的横向弛豫时间信号被级联放大，测量其横向弛豫时间进而对农药残留定量分析。

2.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述羧基磁珠的粒径为500-3000nm。

3.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述氨基纳米磁颗粒的粒径为10-100nm。

4.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述叠氮化物交联剂为二苯基环辛炔-四聚乙二醇-二苯基环辛炔。

5.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述15-叠氮基-4,7,10,13-四氧十五烷酸-N-琥珀酰亚胺基酯与氨基纳米磁颗粒的重量比为1：5。

6.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述单克隆抗体与二苯基环辛炔-四聚乙二醇-活性酯反应的摩尔比为1：10。

7.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：步骤5）所述生物正交反应的反应时间为20min。

8.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述农药为小分子化合物农药。

9.如权利要求1所述的对农药残留进行检测的方法，其特征在于：所述农药的载体蛋白为牛血清白蛋白。