[发明专利]杏褪绿卷叶植原体新疆分离物LAMP快速检测方法在审
申请号: | 201911388582.4 | 申请日: | 2019-12-30 |
公开(公告)号: | CN110878371A | 公开(公告)日: | 2020-03-13 |
发明(设计)人: | 韩剑;罗明;陈杭;张祥林 | 申请(专利权)人: | 新疆农业大学 |
主分类号: | C12Q1/689 | 分类号: | C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/6806;C12Q1/04;C12N15/11 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 830052 新疆维吾尔自*** | 国省代码: | 新疆;65 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 杏褪绿卷叶植 原体 新疆 分离 lamp 快速 检测 方法 | ||
1.杏褪绿卷叶植原体新疆分离物LAMP检测方法,其特征在于,具体检测步骤如下:
(1)设计并提供1套用于检测杏褪绿卷叶植原体新疆分离物的LAMP引物:在Genebank中搜集全部植原体的
ACLR-F3:5'-AGAACGTGGTATTACAATTAACG-3';
ACLR-B3:5'-AGGAACTCCTACTTGTTTAGC-3';
ACLR-FIP:5'-TGCCCAGGACAATCTATGTGACTTCGCACATAGAATATCAAACG -3';
ACLR-BIP:5'-AAGAACATGATCACAGGAGCTGCTTTGAGGCATTACTCCATCT-3';
(2)模板的提取:采用植物基因组提取试剂盒:Plant Genomic DNA Kit,TIANGEN,提取提取杏树枝条韧皮部或叶脉总DNA作为模板;
(3)配制LAMP反应体系:反应体系为25µL,所述的LAMP反应体系为:8 U/µL
(4)通过LAMP反应程序对反应模板进行扩增,所述的LAMP反应程序:将混合物置于61℃恒温反应 60 min,80 ℃灭活 5 min;
(5)LAMP反应结果分析:分析方法1:琼脂糖凝胶电泳,反应结果通过2%的琼脂糖凝胶电泳,用溴化乙锭染色15 min后,在凝胶成像系统上成像,若出现梯形条带判定为阳性,反之,为阴性;分析方法2:肉眼观察反应管中颜色的变化,若扩增产物变为翠绿色则判定为阳性反应,即样品中感染有杏褪绿卷叶植原体新疆分离物,若扩增产物仍为棕黄色则判定为阴性。
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