[发明专利]延龄草总皂苷的提取方法及制药用途

说明书

本发明提供一种延龄草总皂苷的提取方法及制药用途。结果表明延龄草总皂苷可以有效抑制结肠癌CT26细胞增殖，其IC₅₀为9.28μg/mL。Western blotting结果显示延龄草总皂苷可以浓度依赖性降低Ras、Akt、Erk蛋白及其磷酸化蛋白的表达。体内实验表明，与模型组相比，延龄草总皂苷高、中、低均表现出较好的抑制率，分别为51.22%、34.88%和25.02%，呈一定的浓度依赖趋势。HE染色显示延龄草总皂苷可以促进结肠癌细胞的凋亡，其中、高剂量组可见大片肿瘤细胞坏死。Western blotting结果显示延龄草总皂苷可以浓度依赖性降低Ras蛋白的表达水平。延龄草总皂苷可以有效抑制结肠癌CT26细胞增殖，其机制为通过Ras信号通路降低了Ras、Akt、Erk蛋白的表达。

技术领域

本发明涉及一种延龄草总皂苷的提取方法，尤其涉及一种延龄草总皂苷体作为制备治疗结肠癌的药物上的应用。属于生物制药领域。

背景技术

结肠癌是消化系统中最为常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类健康。化疗仍是治疗结肠癌的主要手段之一，但化疗药物严重的副作用和多药耐药等问题使其临床应用受到很大的限制。因此寻找能高效杀伤肿瘤细胞同时毒副作用小的药物，是当今抗肿瘤新药研发的热点。

延龄草(Trillium tschnoskii Maxim)是土家族四大名药之一，其味甘性温，有消痛去肿、止血解毒、安神活血等功效，主治肺痈疮肿、疔疮肿毒、头痛眩晕、神经衰弱等。研究表明，延龄草提取物及皂苷对结肠癌、肺癌、宫颈癌等均有显著抑制作用。RAS是目前所知最保守的癌基因之一，参与细胞生长、增殖、发育及分化调控等重要生理过程，也在细胞恶性转化中起重要作用。RAS蛋白的持续活化可引起细胞快速增殖和抗凋亡信号亢进，由此导致肿瘤发生和发展。Hans Raskov等研究发现，结肠癌的发生与K-ras、APC和P53基因突变高度相关。

发明内容

针对上述技术问题，本发明采用MTT法、RT-PCR、Western blotting方法观察延龄草总皂苷对结肠癌CT26细胞增殖以及裸鼠皮下肿瘤抑制的作用以及探讨其发生的作用机制。

一种延龄草总皂苷的提取方法，包括如下步骤：取延龄草地珠干燥后粉碎，用乙醇浸泡数小时后，回流提取，减压浓缩提取液，冷冻干燥，得到延龄草总提物；

将延龄草总提物加水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，减压浓缩,冷冻干燥，得到萃取物用大孔吸附树脂分离，甲醇洗脱、浓缩干燥，即为延龄草总皂苷。

本发明的又一技术方案是将所述的提取得到的延龄草总皂苷在制备治疗结肠癌的药物上的应用。

作为优选方案，本发明将提取得到的延龄草总皂苷在制备抑制结肠癌CT26细胞增殖的药物上的应用。具体是将提取得到的延龄草总皂苷在制备降低Ras、Akt、Erk蛋白及其磷酸化蛋白的表达的药物上的应用。

在本发明技术方案的基础上，本发明的延龄草总皂苷的用量为5mg/kg-15mg/kg。

本发明体外细胞实验表明延龄草总皂苷对于体外培养的结肠癌CT26细胞的增殖具有抑制作用，IC₅₀值为9.28μg/mL，表明其可能是抗结肠癌的有效成分。体内实验表明延龄草总皂苷有效抑制了裸鼠皮下肿瘤的生长，延龄草总皂苷高、中、低三个浓度也都表现出较好的抑制率，分别为51.22％、34.88％和25.02％，呈浓度依赖趋势。此结果说明延龄草总皂苷体内对肿瘤的生长有抑制效果，与体外细胞实验符合。