[发明专利]一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶及制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗葡萄球菌的宽谱噬菌体编码裂解酶，其特征在于，其核苷酸序列如Seq IDNO.1所示，氨基酸序列如Seq ID NO.2所示。

2.一种权利要求1所述的裂解酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)根据裂解酶的基因序列设计引物，并在两条引物的5’端插入pET28a连接接头，进行PCR扩增，反应结束后，将产物采用1％的琼脂糖凝胶电泳检测，并用胶回收试剂盒回收PCR扩增产物；

(2)将步骤(2)得到的扩增产物连接到质粒载体pET28a，构建裂解酶表达载体pET28a-LysYNP1，转至感受态细胞，过夜培养，筛选得到阳性克隆；

(3)将阳性克隆接种于LB液体培养基中，摇床培养至对数期，然后加入IPTG，摇床过夜诱导表达，得到发酵液；

(4)将诱导后的发酵液进行超声破碎，用PBS重悬，重悬后的细菌采用超声破碎，破碎后的菌液离心处理，取上清，用0.45μm滤膜过滤后获得裂解酶LysYNP1粗提液；

(5)将裂解酶LysYNP1粗提液采用亲和层析纯化，获得纯化的裂解酶LysYNP1。

3.根据权利要求2所述的裂解酶的制备方法，其特征在于，引物序列如下：

F：5’-GGTACCCTCGAGGGATCCATGGCTAAGACTCAAGCAGAA-3’；

R：5’-CTGCAGGTCGACAAGCTTTTAACTCTTGAATGTCCCCCA-3’。

4.根据权利要求2所述的裂解酶的制备方法，其特征在于，PCR反应体系：引物F 2μL，引物R 2μL，噬菌体YNP1基因组2μL，PrimeSTAR Max Premix(2×)25μL，去离子水19μL。

5.根据权利要求2所述的裂解酶的制备方法，其特征在于，PCR反应条件：98℃3min；98℃10s，55℃15s，72℃15s，30个循环；72℃5min。

6.根据权利要求2所述的裂解酶的制备方法，其特征在于，还包括反应结束后，将产物采用1％的琼脂糖凝胶电泳检测，并用胶回收试剂盒回收PCR产物。

7.一种如权利要求1所述的裂解酶在抑制或杀灭原料乳内葡萄球菌中的应用。

8.一种如权利要求1所述的裂解酶在制备防治牛乳房炎药物中的应用。