[发明专利]一种磁珠纯化高活性效应型T细胞方法

说明书

本发明属于生物医学领域，尤其是涉及一种磁珠纯化高活性效应型T细胞方法，其特征在于：包括以下步骤：1）构建诱导记忆性T细胞模型；2）提取细胞混悬液；3）免疫磁珠法分离、纯化CD8+TNA细胞；4）二次磁性分选法分离、纯化CD8+TEM细胞、CD8+TCM细胞；5）采用流式细胞术验证分离后各组分CD8+T细胞的纯度，具有分选纯度高，回收率高，操作简单等特点。

技术领域

本发明属于生物医学领域，尤其是涉及一种磁珠纯化高活性效应型T细胞方法。

背景技术

从生物体内获取原代细胞，我们通常得到的是多种细胞混合的细胞群，为了获得目的细胞，我们需要使用分选方法纯化。现在常用的分选方法一般有两种：流式分选和磁珠分选。流式分选是将单细胞悬液放入高压压入充满鞘液流动室内，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出，喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中，再充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。而磁珠分选是常用的仪器中细胞分离技术，通常使用生物素化抗体标记特定的细胞，再和链霉亲合素蛋白包被的磁珠结合，通过外加磁体形成磁场，磁珠会使被标记的细胞滞留在磁场中，而未通过结合生物素化抗体与磁珠相连接的细胞则不会在磁场中停留，使某个特定标志物是否表达的两类细胞得以分离。磁珠纯化法通常使用纯化系统通过磁场分离磁珠而达到分离和纯化细胞、蛋白或核酸等物质的目的，它与流式分选相比，磁珠纯化法具有提取效率高、分离速度快、所需设备简单等特点。它能把细胞用超级顺磁性的 MACS MicroBeads（MACS微型磁珠）特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱，分选柱里的基质造成一个高梯度磁场，被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出，当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。但是由于磁珠分选多为成品试剂盒，对特定细胞的分离有着多样的限制，而且一般一次只能分离一种细胞，而市面上只有针对小鼠记忆性CD8+T细胞（CD8+ TM）的试剂盒，无法再进一步分离获得小鼠效应记忆性CD8+T细胞（CD8+ TEM）和中央记忆性CD8+T细胞（CD8+ TCM），因此，采用一种合理的细胞纯化方法，是本领域技术人员亟待解决的难题。

发明内容

本发明的目的在于针对上述存在的科学问题，提供磁珠纯化高活性效应型T细胞方法。

本发明的技术方案概述如下：

本发明的一种磁珠纯化高活性效应型T细胞方法，包括以下步骤：

1）构建诱导记忆性T细胞模型。

2）提取细胞混悬液。

3）免疫磁珠法分离、纯化CD8+ TNA细胞。

4）二次磁性分选法分离、纯化CD8+ TEM细胞、CD8+ TCM细胞。

5）采用流式细胞术验证分离后各组分CD8+ T细胞的纯度。

以上所述步骤1）～5）中，将从细胞组织中提取纯度高的记忆性CD8+T细胞CD8+TEM样品。

以上所述步骤1）～5）中，将从细胞组织中提取纯度高的中央记忆性CD8+T细胞CD8+ TCM样品。

本发明突出的实质性特点和显著的进步是：