[发明专利]恶性卡他热病毒的检测试剂盒、制备方法及其用途

说明书

本发明提供恶性卡他热病毒的检测试剂盒、制备方法及其用途，属于生物技术领域，包括包被有MCFV gB重组蛋白的酶标板，所述MCFV gB蛋白为SEQ ID NO.1的序列，酶标抗体，包括HRP标记的MCFV gB重组蛋白多克隆抗体。本发明提高的制备方法能够提高重组蛋白的反应原性和免疫原性，提高纯化后的重组蛋白的纯度；提供的检测试剂盒具有较好的特异性，且操作简单，具有较高的检出率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及恶性卡他热病毒的检测试剂盒、制备方法及其用途。

背景技术

恶性卡他热(Maglignant Catarrhal Fever,MCF)，病原体为疱疹病毒科，疱疹病毒属的恶性卡他热病毒(Maglignant Catarrhal Fever virus,MCFV)。本病毒时疱疹病毒中最为脆弱的一个，很难保存，也很难通过牛与牛之间进行传播，除非洲以外的世界大多数地区，牛的恶性卡他热一般都是通过接触无症状的带毒绵羊而感染。因该病通常呈散发经过，预防免疫无意义，目前尚无特效疗法。因此，通过对恶性卡他热病毒检测，将感染却无症状的带毒绵羊与牛隔离，是牛恶性卡他热的一种重要防控方法。目前对恶性卡他热病毒的检测方法主要为PCR法，但是该方法存在一些弊端：容易引起污染，出现假阳性；需要特殊的仪器设备以及试剂，不适合兽医临床大规模的检验。随着免疫学和生物技术的发展，建立敏感、特异、快速的血清学检测方法对牛恶性卡他热的防控具有重要意义。

现有技术如授权公告号为CN 105807052 B的中国发明专利，公开了一种O型FMDV抗体直接竞争ELISA检测试剂盒，该检测试剂盒中含有酶标板、洗涤液、样品稀释液、HRP标记兔抗、底物A液、底物B液、终止液、阳性对照血清、阴性对照血清以及封板膜，其中所述酶标板包被有O型FMDV基因工程抗原。该试剂盒采用一步法加样，检测时间缩短。使用HRP标记兔抗代替酶标二抗，消除动物种属差异，可检测猪、牛、羊等血清样品。该试剂盒可克服现有血清学诊断技术的不足，具备敏感、特异、快速、制备简单等特点，可广泛应用于O型FMD疫苗免疫效果监测及流行病学调查。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种恶性卡他热病毒的检测试剂盒及其制备方法，该制备方法能够促进可溶性重组蛋白的表达，提高重组蛋白的反应原性和免疫原性；能够促进重组蛋白中His Tag标签的暴露，增强目的蛋白与树脂的特异性结合，提高纯化后的重组蛋白的纯度；该检测试剂盒具有较好的特异性，且操作简单，具有较高的检出率。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

提供一种恶性卡他热病毒的检测试剂盒，该试剂盒利用直接竞争ELISA法对恶性卡他热病毒抗体检测，包括：

包被有MCFV gB重组蛋白的酶标板，MCFV gB蛋白为SEQ ID NO.1的序列；

酶标抗体，包括HRP标记的MCFV gB重组蛋白多克隆抗体；

上述检测试剂盒的结果判断标准为：样品血清抑制率≧28.3％时，为阳性；样品血清抑制率﹤28.3％时，为阴性。

作为优选，上述MCFV gB重组蛋白的制备方法包括：以MCFV基因组为模板，对MCFVgB蛋白基因进行扩增，将得到的PCR产物与表达质粒pET-28a连接后导入大肠杆菌BL21中进行诱导表达，然后经分离纯化获得。

作为优选，上述MCFV gB蛋白基因扩增所用引物为SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4。