[发明专利]转GhFPF1基因棉花插入位点的侧翼序列及其特异性鉴定方法

说明书

本发明公开了一种转GhFPF1基因棉花插入位点的侧翼序列及其特异性鉴定方法，属于生物技术领域。该侧翼序列包括左侧翼序列和/或右侧翼序列；左侧翼序列的第1~501位点序列来源于中棉所24的基因组序列，左侧翼序列的第502~937位点序列来源于转GhFPF1基因棉花的外源插入片段序列；右侧翼序列的第1~466位点序列来源于转GhFPF1基因棉花的外源插入片段序列，右侧翼序列的第467~967位点序列来源于中棉所24的基因组序列。本发明是通过上述侧翼序列对特异性引物进行设计的，通过设计出的引物与待检测样品的PCR产物中是否含有特异性扩增条带，便可判断待检测样品中是否含有转GhFPF1基因棉花成分。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种转GhFPF1基因棉花插入位点的侧翼序列及其特异性鉴定方法。

背景技术

棉花是世界上最主要的经济作物之一，是纺织、精细化工等工业的原料和重要的战略物资。随着生物技术的发展，转基因技术是进行作物重要性状改良的新途径，转基因育种的优势在于可以实现跨物种的基因发掘，拓宽遗传资源的利用范围，实现已知功能基因的定向高效转移，使生物获得人类需要的特定性状，为高产、优质、高抗农业生物新品种培育提供了新的技术途径。中国农业科学院棉花研究所从棉花中克隆得到GhFPF1基因，利用农杆菌介导法将GhFPF1基因的cDNA序列导入棉花品种中棉所24（国家审定GS08001-1997）中，可以获得转基因棉花植株ZF667；对照非转基因棉花品种，转GhFPF1基因棉花ZF667植株表现为赘芽数量明显大量减少、株高增高、单株铃数增加、单铃重量增加等特点。

由于对转基因事件及其衍生品系或品种特异性检测，是实现转基因植物有效监督管理，保障转基因产业健康发展的重要技术手段。外源插入片段的侧翼序列和根据此侧翼序列建立的检测方法，是对转基因植物及其产品进行有效监管的一个重要依据。目前虽然已经有相关专利和文献报道了转基因植物外源插入侧翼序列，但是，关于转GhFPF1基因棉花外源插入侧翼序列相关的文章和专利报道尚未发现。

发明内容

本发明实施例的目的在于提供一种转GhFPF1基因棉花插入位点的侧翼序列，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种转GhFPF1基因棉花插入位点的侧翼序列，包括左侧翼序列和/或右侧翼序列；所述左侧翼序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示，所述右侧翼序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:3所示；所述左侧翼序列的第1~501位点序列来源于中棉所24的基因组序列，所述左侧翼序列的第502~937位点序列来源于转GhFPF1基因棉花的外源插入片段序列；所述右侧翼序列的第1~466位点序列来源于转GhFPF1基因棉花的外源插入片段序列，所述右侧翼序列的第467~967位点序列来源于中棉所24的基因组序列。

本发明实施例的另一目的在于提供一种转GhFPF1基因棉花插入位点的侧翼序列的特异性鉴定引物，所述的引物是依据上述的侧翼序列进行设计的。

作为本发明实施例的一个优选方案，所述的引物包括第一引物和/或第二引物；所述第一引物包括依据左侧翼序列的第1~501位点序列进行设计的第一正向引物以及依据左侧翼序列的第502~937位点序列进行设计的第一反向引物；所述第二引物包括依据右侧翼序列的第1~466位点序列进行设计的第二正向引物以及依据右侧翼序列的第467~967位点序列进行设计的第二反向引物。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述的第一正向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:4所示；所述的第一反向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:5所示。

作为本发明实施例的另一个优选方案，所述的第二正向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:6所示；所述的第二反向引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:7所示。