[发明专利]一种鉴定达氏鲟和中华鲟种质的引物、分子标记及方法

说明书

本发明公开了一种鉴定达氏鲟和中华鲟种质的引物、分子标记及方法，所述的引物核苷酸序列如SEQ ID NO.3～4所示，所述的分子标记为通过所述引物扩增获得的片段，利用本发明引物对基因组DNA进行扩增，对扩增产物进行测序，通过与达氏鲟和中华鲟线粒体DNA序列进行比对，即可鉴定出达氏鲟和中华鲟。本发明方法具有速度快、成本低、易掌握的特点。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种鉴定达氏鲟和中华鲟种质的引物、分子标记及方法。

背景技术

中华鲟(Acipenser sinensis)和达氏鲟(A.dabryanus)均为我国一级重点保护水生野生动物，隶属于鲟形目鱼类，鲟科，鲟属，是分布于长江流域的大型鱼类。中华鲟是一种大型溯河洄游性鱼类，是我国特有的古老珍稀鱼类，世界现存鱼类中最原始的种类之一。远在公元前1000多年的周代，我国就把中华鲟称为“王鲔鱼”。中华鲟属硬骨鱼类鲟形目，最早出现于距今2.3亿年前的早三叠世，一直延续至今，生活于我国长江流域，别处未见，真可谓“活化石”。达氏鲟是一种淡水定居性鱼类，常在江河中下层活动，喜栖息于流速较缓、富腐植质和底栖生物的沙质底或卵石碛坝的河湾或深沱中，生长速度较快，一般体长0.8—1.0米，体重5—10公斤，国家一级保护动物。

地球上显存的26种鲟鱼中，中华鲟和达氏鲟亲缘关系最接近。进化上，有学者认为达氏鲟是中华鲟的陆封种，二者遗传物质DNA存在高度的相似性。目前，达氏鲟和中华鲟的区分主要是从外形来鉴定。达氏鲟与中华鲟的区别是：侧骨板呈三角形、宽大于高，鳃耙呈三角形、鳃耙数多于29。野生鱼的侧骨板上下黑白分明，幼鲟皮肤粗糙，迁徙的幼鱼体色呈黑色，沿侧骨板有一条浅色的线，体色及尾部呈黑色是向顺游迁徙的幼鲟具有的典型特征；家养幼鱼皮肤较光滑，侧骨板以下存在黑色过渡区，在暗光环境下养殖半年以上的鱼，其过渡区黑色变淡，池塘养殖的亲鱼成熟时侧骨板以下颜色接近野生鱼。野生鲟驯养过程中，骨板数特别是侧骨板数会发生较大变化。达氏鲟为淡水定居性鱼类，除产卵期外，不进行远距离洄游。

现有技术仅适用于鉴定年龄较大的两种鲟鱼，很难从外观上区别个体较小的两种鱼。且现有技术从鳃耙数量及形态来鉴定种质，需要杀鱼解剖才能实现，不适用于鲟鱼这类极度濒危保护物种。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于鉴定达氏鲟和中华鲟种质的引物，从分子生物学上对达氏鲟和中华鲟进行区分和鉴定，并提供了利用该引物的鉴定方法，具有有速度快、成本低、易掌握的优点。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种用于鉴定达氏鲟和中华鲟种质的引物，包括：

上游引物D-F：GCCCTAGTAGCTTAGACATCAAAG；

下游引物D-R：GTGCGTGCCTGATACCTGC。

本发明还提供了一种用于鉴定达氏鲟的分子标记，所述的分子标记为以达氏鲟基因组DNA为模板，通过引物D-F和D-R扩增获得的片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

同理，一种用于鉴定中华鲟的分子标记，所述的分子标记为以中华鲟基因组DNA为模板，通过引物D-F和D-R扩增获得的片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在本发明的另一方面，提供了一种鉴定达氏鲟和中华鲟种质的方法，包括以下步骤：

1)样本基因组DNA的提取，采用CTAB法进行；

2)以提取的基因组DNA为模板，利用引物D-F和D-R进行PCR扩增；

3)对扩增产物进行测序，通过与达氏鲟和中华鲟线粒体DNA序列进行比对，即可鉴定出达氏鲟和中华鲟。