[发明专利]一种纳米碳酸钙微粒及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，本发明提供了一种本发明提供了一种纳米碳酸钙微粒，以聚乳酸‑羟基乙酸(PLGA)和聚乳酸‑羟基乙酸‑聚乙二醇(PLGA‑PEG)为壳层，以碳酸钙为核层。本发明提供的纳米碳酸钙微粒(聚乳酸‑羟基乙酸碳酸钙制剂)由聚乳酸‑羟基乙酸、聚乳酸‑羟基乙酸‑聚乙二醇和碳酸钙组成，粒径均一，在水中分散良好，在水中粒径主要集中在120nm左右。实验表明本发明所述聚乳酸‑羟基乙酸碳酸钙微粒有良好的增强肿瘤免疫治疗的效果，能够作为肿瘤免疫治疗的佐剂。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种纳米碳酸钙微粒及其制备与 应用。

背景技术

肿瘤(tumour)是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形 成的新生物(neogrowth)，因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生 物(neoplasm)。根据新生物的细胞特性及对机体的危害性程度，又将肿瘤分 为良性肿瘤和恶性肿瘤两大类，而癌症即为恶性肿瘤的总称。与良性肿瘤相 比，恶性肿瘤生长速度快，呈浸润性生长，易发生出血、坏死、溃疡等，并 常有远处转移，造成人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏 器功能受损等，最终造成患者死亡。由于人口老龄化等原因，当前我国癌症 发病率、死亡率呈持续增长趋势。世界癌症报告估计，2012年中国癌症发病 人数为306.5万，约占全球发病人数的五分之一；癌症死亡人数为220.5万，约 占全球癌症死亡人数的四分之一。今后20年，我国癌症的发病数和死亡数还 将持续上升：根据国际癌症研究署预测，如不采取有效措施，我国癌症发病 数和死亡数到2020年将上升至400万人和300万人；2030年将上升至500万人和 350万人。

肿瘤免疫治疗是一种通过激活人体自身免疫系统来抑制肿瘤生 长的治疗手段，其核心在于有效激活肿瘤患者体内的T淋巴细胞的抗 肿瘤反应，实现对肿瘤生长的特异性抑制和杀灭。其中，免疫检查点 阻断疗法是激活治疗性抗肿瘤免疫最有前途的方法，在临床取得了较 好的治疗效果。但是，目前仍面临着响应率较低的问题，限制了其临 床应用。由于肿瘤细胞的快速增殖、代谢途径改变、肿瘤血管发育畸 形等原因，实体肿瘤常有着乏氧、微酸、间隙压高、高活性氧、免疫 耐受等一系列与正常组织不同的微环境特征。其中，肿瘤微酸不但可 以通过降低T细胞分泌IFN-β和TNF-α等效应性细胞因子、并诱导T 淋巴细胞凋亡等途径来抑制机体的抗肿瘤免疫功能，还会导致抗体降 解与失活，进而对基于anti-PD-1/PD-L1等免疫检查点阻断疗法的疗效 产生负面影响。目前大量科学家致力于开发调节肿瘤微环境的药物和 治疗方法，以实现增强的肿瘤免疫治疗。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种纳米碳酸钙微粒，本 发明提供的纳米碳酸钙微粒具有良好的调节肿瘤微酸环境的效果，能够增强 肿瘤免疫治疗效果。

本发明提供了一种纳米碳酸钙微粒，以聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)和聚 乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇(PLGA-PEG)为壳层，以碳酸钙为核层。

优选的，所述纳米碳酸钙微粒粒径为100～120nm。

本发明提供了一种纳米碳酸钙微粒的制备方法，包括：

A)将聚乳酸-羟基乙酸、聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇在溶剂中混合，得到 PLGA和PLGA-PEG混合溶液；

B)将PLGA和PLGA-PEG混合溶液与NaHCO₃溶液混合，乳化，得到 第一乳液；

将PLGA和PLGA-PEG混合溶液与CaCl₂水溶液混合，乳化，得到第 二乳液；

C)将第一乳液和第二乳液混合，乳化，得到第三乳液；

D)将第三乳液分散于聚乙烯醇水溶液中，搅拌、洗涤得到 CaCO₃@PLGA-PEG。