[发明专利]一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂及其在土壤污染修复中的应用

权利要求书

1.一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述微生物菌剂为含有约氏不动杆菌AJ6菌悬液的固定化微生物菌剂。

2.根据权利要求1所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述的菌悬液通过以下方法制备：

将约氏不动杆菌AJ6活化后，接种于固体培养基中，并于28℃的恒温恒湿培养箱培养48h至微生物的生物量达到最大，然后用无菌生理盐水将细菌冲洗下来配制成OD600为0.5±0.01的菌悬液。

3.根据权利要求1或2所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述的固定化微生物菌剂通过以下方法制备：

将已洗净烘干磨碎的载体灭菌处理后加入无菌无机盐培养基，再加入约氏不动杆菌AJ6的菌悬液作为接种液接种，混匀密封后于28℃恒温恒湿培养箱培养至生物量最大而制得固定化微生物菌剂。

4.根据权利要求3所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述的载体为甘蔗渣、花生壳和稻草杆中的一种或几种。

5.根据权利要求4所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述载体为甘蔗渣时，所述无机盐培养基与处理过的甘蔗渣的用量比为7.5mL：1g。

6.根据权利要求4或5所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于接种的菌悬液OD600为0.5±0.01，所述菌悬液与处理过的甘蔗渣的用量比为3.5mL：1g。

7.根据权利要求1所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述约氏不动杆菌AJ6菌株通过以下步骤得到：

a、四环素类抗生素耐受菌的筛选、驯化：用土霉素筛选培养基从猪粪样品的菌悬液中筛选菌种并富集培养驯化获得耐受菌株；

b、四环素类抗生素降解菌的分离和纯化：将驯化获得的耐受菌株采用平板涂布法和平板划线法进行菌株的分离与纯化获得单一菌株；

c、将分离纯化的每一单一菌株接种到含四环素类抗生素唯一碳源的无机盐培养基中进行降解实验筛选获得降解能力最强的菌株，即为约氏不动杆菌AJ6。

8.根据权利要求7所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述步骤a中筛选培养基中土霉素的浓度依次是10mg/L、50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/L、250mg/L，每个浓度转接6次。

9.根据权利要求7所述的一种高效降解四环素类抗生素的微生物菌剂，其特征在于所述步骤c中的四环素类抗生素分别为土霉素和四环素。

10.一种权利要求1所述降解四环素类抗生素的微生物菌剂在土壤污染修复中的应用，其特征在于所述微生物菌剂的用量为以蔗渣载体1重量份处理其10倍重量份的污染土壤。