[发明专利]一种采用大肠杆菌表达串联序列制备GLP-1或其类似物多肽的方法有效
| 申请号： | 201911373533.3 | 申请日： | 2019-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN111072783B | 公开（公告）日： | 2021-09-28 |
| 发明（设计）人： | 辛中帅;赵珊珊;文良柱;平康康;徐晓峰;李夷平 | 申请（专利权）人： | 万新医药科技（苏州）有限公司;江苏万邦医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K14/605;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 杜静;张磊 |
| 地址： | 215123 江苏省苏州市苏州工*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 采用 大肠杆菌 表达 串联 序列 制备 glp 类似物 多肽 方法 | ||
1.一种GLP-1或其类似物重组串联蛋白，其特征在于，所述重组串联蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.28- SEQ ID NO.111任意一种所示。
2.编码权利要求1所述GLP-1或其类似物重组串联蛋白的基因。
3.包含权利要求2所述基因的重组质粒或宿主细胞。
4.一种应用大肠杆菌表达制备GLP-1或其类似物重组串联蛋白的方法，其特征在于，采用大肠杆菌表达权利要求1所述的GLP-1或其类似物重组串联蛋白序列。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，采用的大肠杆菌是BL21 (DE3)、HMS174(DE3)、pLysS 或 pLysE 宿主菌。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括破碎菌体获得包涵体、溶解包涵体、酶切获得GLP-1或其类似物。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的溶解包涵体的方法，采用25-250mM的Tris溶液，pH 8.5-11.5，12-15℃进行溶解2~6h。
8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，GLP-1或其类似物重组串联蛋白用胰蛋白酶和CPB酶双酶切法、或者是Kex2酶和CPB酶双酶切法酶切获得。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，酶切所用缓冲液为25-250mM 的Tris溶液或磷酸盐缓冲液，pH 7.0-10.0；温度15-30℃，双酶切中的两种酶均按照串联总蛋白质量1/400-1/800加入，酶切4-12h。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，酶切所用缓冲液pH为8.0-9.0。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，酶切温度为25℃。
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