[发明专利]一种肺癌辅助诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种肺癌辅助诊断试剂盒。一种肺癌FBXW7突变基因，该突变位于FBXW7基因的10号外显子上，CDS序列第1444位碱基A突变为G(c.1444AG)，对应第482位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸(p.Thr482Ala)。本发明公布了一种新的肺癌FBXW7基因突变，并验证了该突变具有高度致病性可能。本发明提供了检测该突变的引物序列及相关反应体系，可用于制备肺癌辅助诊断试剂，通过PCR扩增测序实现该突变位点检测，比NGS更加快速、简便、低成本。

技术领域

本发明属于生物医学诊断领域，涉及一种肺癌辅助诊断试剂盒。

背景技术

肺癌是全世界最常见的恶性肿瘤，也是癌症相关死亡的首位死因。在我国，其发病率和死亡率亦居首位。但由于缺乏有效的早期诊断方法，导致70％-80％的患者在确诊时已处于晚期，预后不佳，5年生存率仅15％。近年来随着基因分析和分子诊断技术的不断发展及测序技术的应用，越来越多的肺癌基因靶点被陆续发现，解析肺癌的遗传特征谱以及找到更多新型的肺癌驱动基因不仅可以使肺癌分子诊断的方法更加简单、快速，而且可以为肺癌的靶向治疗提供更多潜在药物靶点，以提高患者的预后及远期生存率，为肺癌患者长期生存带来新的希望。

FBXW7基因(也称为AGO、SEL-10和hCDC4)已被证明是一种抑癌基因，该基因位于染色体4q32，由1个特异性的外显子和10个共有的外显子组成，包括FBXW7α、FBXW7β和FBXW7γ三种亚型。这个基因编码的蛋白属于F-box蛋白家族成员，为SCF(SKP1-cullin-F-box)型泛素连接酶的靶蛋白识别成分，在磷酸化依赖的泛素化中发挥重要作用。FBXW7能通过介导泛素蛋白酶体途径降解Cyclin E、c-Jun、c-Myc、Notch、mTOR、Aurora-A、KLFS等多种癌蛋白来参与肿瘤的发生、发展，同时也为肿瘤的诊断和治疗提供了新的靶点。该基因缺陷会导致染色体不稳定，在细胞增殖、分化、细胞周期进程、损伤应答、凋亡等多种细胞生物学过程中起关键的负调节作用。目前已在包括肺癌等多种肿瘤中发现FBXW7突变，对COSMIC数据库中体细胞突变目录的分析表明，FBXW7在所有含家族成员的F-box以及SCF泛素连接酶复合物中具有最高的突变频率。人类肿瘤的FBXW7总突变率为2.54％。其中72.70％的FBXW7突变为错义突变，包括R465H、R505C、R505H、G579W、R858Q等，13.82％为无义突变，插入/缺失突变占FBXW7突变的7.89％，可见以单核苷酸改变为特征的错义突变是FBXW7突变最主要类型。错义突变导致FBXW7编码的蛋白质功能异常，从而使SCF复合体功能改变或失活，与肺癌的发生发展密切相关，然而目前仍有许多突变位点未被发现与报道。

目前高通量测序是唯一可以明确未知突变位点的检测手段,然而高通量测序费用高昂，检测周期长，检测平台稀缺，对样品质量要求高，不利于普及推广，对于大多数患者来说也不是首选检测手段。因此，针对新发现的致病突变位点设计特异性的PCR引物进行PCR扩增并测序，是准确、便捷、经济的方法，对于肿瘤基因诊断和靶向治疗的选择具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的肺癌致病突变基因。

本发明的又一目的是提供检测该基因的试剂的应用。

本发明的又一目的是提供含有该基因检测试剂的肺癌辅助诊断试剂盒。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

一种肺癌FBXW7突变基因，野生型FBXW7基因在Genbank中的登录号为NM_033632.3,该突变位于FBXW7基因的10号外显子上，CDS序列第1444位碱基A突变为G(c.1444AG)，对应第482位的氨基酸由苏氨酸突变为丙氨酸(p.Thr482Ala)。

本发明所述的肺癌FBXW7突变基因作为检测靶点在制备肺癌辅助诊断试剂中的应用。

检测本发明所述的肺癌FBXW7突变基因的试剂在制备肺癌辅助诊断试剂中的应用。