[发明专利]羟腈裂解酶突变体及在(R)-沙美特罗合成中的应用

权利要求书

1.一种羟腈裂解酶突变体，其特征在于，其是由下述任一氨基酸序列组成的蛋白质：

(1)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸；

(2)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第73位丙氨酸替换为天冬氨酸、苏氨酸或天冬酰胺；

(3)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第76位亮氨酸替换为缬氨酸；

(4)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第110位天冬酰胺替换为丝氨酸；

(5)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第329位缬氨酸替换为半胱氨酸；

(6)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为缬氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、丙氨酸或甘氨酸；

(7)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第333位丝氨酸替换为缬氨酸或半胱氨酸；

(8)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第340位脯氨酸替换为亮氨酸或甲硫氨酸；

(9)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第343位亮氨酸替换为丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸或苯丙氨酸；

(10)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第358位组氨酸替换为缬氨酸；

(11)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为半胱氨酸；

(12)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸；

(13)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第73位丙氨酸替换为天冬氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸；

(14)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸，第73位丙氨酸替换为苏氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸；

(15)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸，第111位丙氨酸替换为半胱氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸；

(16)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第340位脯氨酸替换为甲硫氨酸；

(17)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第340位脯氨酸替换为亮氨酸；

(18)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第343位亮氨酸替换为苯丙氨酸；

(19)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第72位苯丙氨酸替换为缬氨酸，第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第340位脯氨酸替换为甲硫氨酸，第358位组氨酸替换为缬氨酸；

(20)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第333位丝氨酸替换为缬氨酸，第329位缬氨酸替换为半胱氨酸；

(21)将如SEQ ID No.1所示氨基酸序列的第73位丙氨酸替换为天冬酰胺，第331位亮氨酸替换为丙氨酸，第343位亮氨酸替换为苯丙氨酸。

2.一种分离的核酸，其特征在于，所述核酸是编码如权利要求1所述羟腈裂解酶突变体的核酸分子。

3.一种包含如权利要求2所述核酸的重组表达质粒。

4.一种包含如权利要求3所述重组表达质粒的重组表达转化体。

5.如权利要求1所述羟腈裂解酶突变体或如权利要求4所述重组表达转化体的培养物或分泌上清作为催化剂在催化大位阻芳基取代醛不对称羟氰化反应制备光学纯氰醇中的应用。