[发明专利]一种检测ANNK1基因rs1800497位点的实时荧光PCR方法及其引物探针组合

说明书

本发明属于基因诊断领域，公开了一种检测ANKK1基因rs1800497位点的实时荧光PCR方法及其引物探针组合。其中：上游引物FpC:5’‑AGCTGGGCGCCTGCCGC‑3’，上游引物FpT:5’‑AGCTGGGCGCCTGCCGT‑3’，下游引物Rp：5’‑GCAAATGTCCACGCCCGCA‑3’，探针Probe：5’‑FAM‑AGCACTTTGAGGATGGCTGTGT‑BHQ2‑3’。PCR反应完成后，可通过扩增曲线的有无并结合Ct值分析结果。本发明采用本发明所提供的检测方法进行rs1800497位点多态性的检测，具有操作简便、分辨率高、无污染、高通量等优点。

技术领域

本发明属于药物基因组学和基因检测领域，具体涉及一种针对ANNK1基因rs1800497位点(ANNK1，c.2137G>A)等位基因的特异性引物及探针设计，以及检测方法。

背景技术

抑郁症是现代人常见的精神疾病，严重影响患者的心理健康和生命安全。在临床上，抑郁症的主要症状有情绪失落、闷闷不乐、记忆力下降等，严重的患者会有自杀行为。抑郁症患者可能用吸烟自我治疗，形成烟草依赖。但是在精神病状态时，一些幻觉妄想等精神症状能导致焦虑紧张抑郁等负性情绪，间接导致病人吸烟量增加。调查结果表明精神分裂症病人吸烟显著高于(可达80％以上)正常人群(30～35％)和一般精神障碍(35～54％)。虽然戒烟过程的实施比较复杂，但可以依靠戒烟药的帮助提高其戒断率。抗抑郁药安非他酮是近年进入戒烟药领域的新品种。1997年美国食品药品管理局(FDA)已批准安非他酮作为戒烟的一线治疗，非尼古丁戒烟的首选。其作用机制可能是安非他酮能较弱的阻断尼古丁受体，通过对患者中枢神经系统中的多巴胺及去甲肾上腺素的再摄取，从而促进相应功能的激发发挥戒烟作用，达到抗抑郁效果。

安非他酮在临床应用时发现其具有良好的帮助戒烟作用，然而戒烟效果却不尽相同。研究发现可能与遗传因素有关。多巴胺D2受体(DRD2)基因位于11q23.2，编码G蛋白偶联受体，其多态性Taq1A(c.2137G>A，rs1800497)位于DRD2基因3’-端非编码区(3-UTR)，虽然在既往的研究中“DRD2 Taq1A多态性”这种提法很常见，但是实际上Taq1A位于和DRD2基因邻近的ANKK1(Ankyfin repeat and kinase domain containing 1，锚蛋白重复和激酶域)基因，严格讲并非在DRD2基因上。Taq1A变体可能通过改变DRD2基因的功能，进而影响DRD2的合成。Taq1A基因多态性与尼古丁依赖以及安非他酮辅助戒烟的疗效之间的关联已经得到了证明。David等(2007年)征集722名欧洲成人吸烟志愿者接受10周安慰剂或安非他酮进行药物辅助戒烟治疗，研究发现在6个月和12个月随访时，与使用安慰剂的戒烟者相比，使用安非他酮携带Taq1 A2/A2基因型的吸烟者戒烟的比安慰剂高了3倍(35.2％vs.15.1％；OR＝3.25)，而在任何时间点，A1/A1或A1/A2基因型参与者中，安非他酮相对于安慰剂在戒烟结局方面均无明显益处。这些数据表明，安非他酮可能仅对具有DRD2Taq1 A2/A2基因型的吸烟者亚组有效。另外，Swan GE等(2005年)研究报道携带有A1基因型的女性戒烟者因发生药物毒副作用而停药的风险显著高于Taq1 A2/A2基因型戒烟者(OR＝1.91，P＜0.04)。因此，开发一种简便、快速、灵敏的ANKK1 rs1800497位点基因多态性的检测方法，对于确定戒烟者的遗传特征，以便预测戒烟者对于安非他酮的应答，制定个体化的治疗方案，具有重要的临床价值。