[发明专利]一种基于葡聚糖信号放大的p16INK4a

权利要求书

1.一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括p16^INK4a校准品，p16^INK4a抗体磁珠，吖啶酯标记葡聚糖多聚p16^INK4a抗体，缓冲液，稀释缓冲液以及洗涤液；

所述吖啶酯标记葡聚糖多聚p16^INK4a抗体的制备方法为：

(1)葡聚糖活化：将葡聚糖溶于磷酸盐缓冲溶液中，加入适量高碘酸钠进行氧化，用葡聚糖基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜；

(2)吖啶酯活化：加入NHS旋涡混合，再加入EDC旋涡混合；摇床100-500r/min，30-37℃反应10-30min；其中NHS:EDC的质量浓度比为25:10；

(3)偶联：离心后去除上清，加入超纯水，超声复溶，重复离心复溶，加入p16^INK4a单克隆抗体和活化葡聚糖，旋涡混合，摇床100-500r/min，30-37℃反应1-3h；

(4)封闭，洗涤，保存。

2.根据权利要求1所述一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述p16^INK4a抗体磁珠的制备方法为：

(1)免疫磁珠的活化：加入NHS旋涡混合，再加入EDC旋涡混合；摇床100-500r/min，30-37℃反应10-30min；其中NHS:EDC的质量浓度比为25:10；

(2)偶联：离心后去除上清，再加入超纯水，超声复溶，重复离心复溶，加入p16^INK4a单克隆抗体，旋涡混合，摇床100-500r/min，30-37℃反应1-3h；磁珠与抗体的标记比例为(50-150):1；

(3)封闭，洗涤，保存。

3.根据权利要求2所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述磁珠粒径为100nm-5μm，表面修饰为羧基、羟基或链霉亲和素中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述校准品为用缓冲液将p16抗原配制成0-100pg/mL系列浓度的校准溶液系列。

5.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括缓冲体系、封闭试剂、阻断剂和防腐剂；

所述缓冲体系包括PBS、Tris或CBS缓冲液中的任意一种，且浓度为10-50mmol/L，PH值为7.0-9.0；

所述封闭试剂包括牛血清白蛋白或酪蛋白中的任意一种，且质量浓度为1-15％；

所述阻断剂包括IgG蛋白，且质量浓度为0.1-1％；

所述防腐剂包括叠氮钠或Proclin 300中的任意一种，且质量浓度为0.01-0.1％。

6.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述稀释缓冲液配方包括：10-50mmol/L Tris-HCl、0.1-5％酪蛋白、1--5％BSA、0.01-1％Proclin300、0.01％-1Tween 20、0.9％NaCl，缓冲液调pH至7.2-7.4。

7.根据权利要求1所述的一种基于葡聚糖信号放大的p16^INK4a化学发光试剂盒，其特征在于，所述洗涤液配方包括：10-50mmol/L的Tris-HCl、0.01-1％的Tween 20和0.9％的NaCl，缓冲液调pH至7.2-7.4。