[发明专利]一种纤维素链霉菌发酵提取物及其应用

说明书

本发明涉及一种纤维素链霉菌发酵提取物及其应用，将保藏号为CCTCC NO：M2017188的纤维素链霉菌YIM PH20352（Streptomyces cellulosae YIM PH20352）菌株，通过1）培养菌株试管种、2）培养菌株液体种子、3）菌株发酵并提取浓缩后获得菌株发酵提取物，该发酵提取物对三七根腐病病原真菌具有较好的离体抑制活性，可应用于制备抗三七根腐病剂。

技术领域

本发明涉及一种纤维素链霉菌YIM PH20352发酵提取物及其应用，属于微生物农药技术领域。

背景技术

三七（Panax notoginseng）是我国传统名贵中药材，其喜好在温暖阴湿环境生长的特性，非常容易诱发各种土传微生物病害，根腐病是导致三七连作障碍的重要因素之一。目前主要依赖代森锰锌、多抗霉素等杀真菌农药对三七根腐病进行防治，但长期施用化学农药易导致病害产生抗药性及农田微生态平衡被破坏，且农药的大量使用所带来的重金属污染和农药残留严重地影响着三七的品质和药用价值，严重制约着三七种植业的发展。生物防治以其无污染，无残留，无生态毒性和安全性好等优点在植物病害的防治中起着主导作用，近年来人们通过利用拮抗三七根腐病的有益微生物进行三七根腐病害的生物防治，为三七根腐病的防治提供了一条重要而有效的途径。本发明筛选得到一株对三七根腐病病原真菌有较好抑制活性的纤维素链霉菌菌株，其发酵产物在三七根腐病的生物防治中具有潜在和实际的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纤维素链霉菌YIM PH20352发酵提取物及其应用。

本发明是这样实现的：

发明人在前期研究中，筛选得到一株对三七根腐病病原真菌具有较好抑制活性的纤维素链霉菌YIM PH20352（Streptomyces cellulosae YIM PH20352），该菌株已于2017年4月11日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏号为CCTCC NO：M2017188。

本发明的纤维素链霉菌YIM PH20352发酵提取物经过如下步骤得到：

（1）试管种培养：将保藏号为CCTCC NO：M2017188的纤维素链霉菌YIM PH20352（Streptomyces cellulosae YIM PH20352）菌株接种到试管固体培养基的斜面上，于28°C的温度下培养6天，获得菌株试管种。

其中，固体培养基配方为：酵母粉4.0 g；葡萄糖4.0 g；麦芽膏5.0 g；复合维生素3.5 mg；琼脂粉12.0 g；水1000 mL；pH 7.2。

（2）培养液体种子：采用500 mL三角瓶摇瓶培养，先配制液体种子培养基，在每个三角瓶中装入100 mL液体培养基，于120°C的温度下灭菌30分钟，冷却后接入1cm²大的菌株试管种，于28°C的温度下于转速为220 rpm的摇床上培养3天，获得液体种子。

其中，液体种子培养基配方为酵母粉4.0 g；葡萄糖4.0 g；麦芽膏5.0 g；复合维生素3.5 mg；水1000 mL；pH 7.2。

（3）制备菌株发酵提取物：采用1000 mL三角瓶摇瓶培养，先配制液体发酵培养基，在每个三角瓶中装入200mL液体发酵培养基，于120°C的温度下灭菌30分钟，冷却后接入20mL上述方法（2）中获得的液体种子，在28°C的温度下于转速为220 rpm的摇床上培养6天后获得菌株发酵液，在发酵液中加入等体积乙醇，经摇床振荡6小时后滤去菌丝体并蒸去上清液中的乙醇，即得到菌株发酵提取物。