[发明专利]伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒qPCR试剂盒及方法

说明书

本发明属于动物疫病分子生物学检验方法及检验试剂领域，特别涉及一种伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒qPCR试剂盒及方法，用于猪病原的快速检测。针对伪狂犬病毒和猪戊型肝炎病毒的保守序列，分别设计PCR引物和荧光TaqMan探针，构成专门针对伪狂犬病毒和戊型肝炎病毒的引物组和探针组，组成二重荧光定量PCR检测试剂盒，用于伪狂犬病毒和猪戊型肝炎病毒的检测，该检测方法具有操作简便、敏感性高等优点，反应结束即可根据扩增曲线判定结果，实现同时检测和鉴别伪狂犬病毒和猪戊型肝炎病毒两种病原体，该方法既可以节约时间的成本，又可以减少污染，具有极高的应用价值。

技术领域

本发明属于动物疫病分子生物学检验方法及检验试剂领域，特别涉及一种伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒qPCR试剂盒及方法。

背景技术

伪狂犬病毒(Pseudorabies viurse，PRV)是a-疱疹病毒亚科的一种高度接触性传染病。猪是唯一的自然宿主。该病可导致怀孕母猪的流产、死胎、木乃伊胎和种猪不育等症状；哺乳仔猪常出现神经症状和死亡；成年猪一般呈亚临床或隐性感染，成为病毒的贮存宿主，长期排毒。

戊型肝炎(Hepatitis E)是一种由戊型肝炎病毒(HEV)引起的急性病毒性肝炎，主要通过粪-口消化道传播。戊型肝炎呈全球分布，以暴发流行或散发感染的形式存在，在世界范围内，无论HEV在这个地区是否流行，猪感染HEV的现象非常普遍。HEV主要包括14个基因型，其中基因4型具有人兽共患的性质，在人群和猪群中主要以基因4型HEV感染为主。研究发现从猪体内分离的基因4型HEV能够感染人，反之亦然，并且基因4型HEV对人的致病性较其他基因型更强，危害也更大。对戊型肝炎病毒的快速准确诊断是临床上防治猪戊型肝炎病毒的关键。目前实验室诊断HEV和PRV的方法大致可分为2类：①血清学方法，如ELISA方法、血清中和实验、免疫荧光等；②分子生物学方法。血清学方法存在假阳性过多的问题和现象，并且不适于HEV和RPV感染的早期做出快速准确的诊断。

发明专利“猪伪狂犬病野毒株与基因缺失株的双重实时荧光定量PCR检测试剂盒及引物和探针(公开号CN201610634845)”、发明专利“猪伪狂犬病毒野毒株的荧光定量PCR检测引物、探针和试剂盒(公开号CN201410217702)”描述了检测伪狂犬病毒野毒株的荧光定量PCR方法，可以检测伪狂犬病毒但是没法同时检测戊型肝炎病毒。因此，发明一种伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒qPCR试剂盒及检测方法，使其可以在一个PCR反应管中同时检测狂犬病毒和戊型肝炎病毒，减少操作流程，具有重要的实际应用价值。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒qPCR试剂盒及方法，克服现有同时检测伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒检测技术方面存在的缺陷和不足，分别提供伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒的检测引物及探针，所述引物可快速准确的检测伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒。一个PCR反应可以同时检测两种病原，快速方便可用于猪病原鉴定，有利于开展流行病学调查，预防和控制疫情传播。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

本发明所述的伪狂犬病野毒和猪戊型肝炎病毒qPCR试剂盒，其特征在于包括以下引物对和探针：

检测伪狂犬病野毒的引物对和探针RPV-Pro，所述检测伪狂犬病野毒的引物对包括SEQIDNO：1所示的上游引物RPV-F和SEQIDNO：2所示的下游引物RPV-R，所述探针RPV-Pro的序列为SEQIDNO：3所示；

检测猪戊型肝炎病毒的引物对和探针HEV-Pro，所述检测猪戊型肝炎病毒的引物对包括SEQIDNO：4所示的上游引物HEV-F和SEQIDNO：5所示的下游引物HEV-R，所述探针HEV-Pro的序列为SEQIDNO：6所示。