[发明专利]一种高盐血液中心血管药物含量的检测方法

说明书

本发明的目的是提供一种高盐血液中心血管药物含量的检测方法，从而克服目前高盐血液样品检测尼群地平、尼莫地平和硝苯地平中存在的问题。本发明的方法实现了对任何有电化学信号的高盐样品的高灵敏、高选择性检测。进一步应用于药品制剂的质量控制和药品代谢研究，与传统的色谱富集分离相比，具有简单、快速、稳定、成本低、富集效率高等优点，有望应用于药品制剂的质量控制并成为复杂生物样品研究的辅助手段。

技术领域

本发明属于药物组分、含量检测技术领域，具体涉及一种高盐血液中心血管药物含量的检测方法。

背景技术

中国心血管病流行趋势明显，导致心血管病的发病人数及死亡率逐年增加。尼群地平(Nitrendipine，NT)、尼莫地平(Nimodipine，NM)和硝苯地平(Nifedipine，NF)。血液中含有盐，电导很高，如果不对样品进行预处理，用传统的场放大样品进样很难达到分离。而pH调制堆积法克服了传统的场放大样品进样方法的缺点，避免了由于样品区带的电导高于缓冲溶液而出现的去堆积现象。目前测定心血管药物的色谱方法有液相色谱-质谱联用法、液相色谱法以及胶束电动色谱法。其中液相色谱法和质谱法对检测器要求较高，普通胶束电动色谱法因富集因子小且检测灵敏度不高，无法满足复杂生物样品的检测和分离。

发明内容

本发明的目的是提供一种高盐血液中心血管药物含量的检测方法，从而克服目前高盐血液样品检测尼群地平(Nitrendipine，NT)、尼莫地平(Nimodipine，NM)和硝苯地平(Nifedipine，NF)中存在的问题。

检测的方法，包括如下的步骤：

1)样品的前处理

首先，将加入抗凝剂的待检测血样静置离心后(30℃静置，然后以3000r/min离心10min)，取上清液；加入甲醇(甲醇加入量为上清液体积的50％)涡旋混合后超声，超声液体进行离心后(3000r/min离心10min)取上层液，氮气吹干残留甲醇，作为待检测的样品；

2)双重富集过程

在毛细管电泳仪的毛细管中先充满分离缓冲液，其中分离缓冲液的配置方法如下：首先将30mmol/L的Na₂B₄O₇溶液和1mmol/L的Na₂HPO₄溶液调节为pH为9.10的样品缓冲液，然后将此样品缓冲液、SDS和甲醇以22:7:1的体积比配制MEKC分离缓冲液；

再将步骤1)制备的待检测的样品电迁移引入毛细管中，电泳电源用正高压，进样电压15kV，样品进样时间为60s；随后采用电动进样方式加入pH为3.12的磷酸溶液，磷酸溶液进样80s；随后将毛细管正极放入分离缓冲液中，在20kV正高压下分离；

3)定量检测

根据尼群地平、尼莫地平和硝苯地平标准品的回归方程，对各分析物的峰电流和浓度进行回归分析获得待检测血样中尼群地平、尼莫地平和硝苯地平的含量；

其中尼群地平的回归方程如下：y(mg/L)＝0.71x(mA)+0.041；

尼莫地平的回归方程如下：y(mg/L)＝0.58x(mA)+0.033；

硝苯地平的回归方程如下：y(mg/L)＝0.67x(mA)+0.038。

本发明的方法实现了对任何有电化学信号的高盐样品的高灵敏、高选择性检测。进一步应用于药品制剂的质量控制和药品代谢研究，与传统的色谱富集分离相比，具有简单、快速、稳定、成本低、富集效率高等优点，有望应用于药品制剂的质量控制并成为复杂生物样品研究的辅助手段。

附图说明

图1：自组装毛细管电泳系统图；

图2：场放大样品进样方法分离图；