[发明专利]一种基于核酸识别诱导的荧光生物传感器及应用

权利要求书

1.一种基于核酸识别诱导的荧光生物传感器，其特征是，由金纳米颗粒、识别序列和n种信号探针组成，识别序列为单链DNA，金纳米颗粒表面连接若干识别序列的一端，信号探针为一端连接荧光基团的单链DNA，每种信号探针的荧光基团均不相同，信号探针的单链DNA序列由第一DNA序列和第二DNA序列组成，荧光基团与第二DNA序列连接，每条与金纳米颗粒连接的识别序列均与n种信号探针的第一DNA序列杂交，所述识别序列与miRNA-155互补，且识别序列与miRNA-155杂交后，不仅使得识别序列3'端变为能够被核酸外切酶III识别并水解的平末端，而且使得n种信号探针均与识别序列解链；其中，n为大于1的自然数。

2.如权利要求1所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器，其特征是，所述n为2；

优选的，一种荧光基团为Cy3，另一种荧光基团为Cy5。

3.如权利要求1所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器，其特征是，识别序列通过巯基与金纳米颗粒连接。

4.如权利要求1所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器，其特征是，制备方法为：将金纳米颗粒与巯基修饰的识别序列混合后进行第一次孵育，使识别序列连接在金纳米颗粒表面，然后加入n种信号探针进行第二次孵育，使得每条与金纳米颗粒连接的识别序列均与n种信号探针的第一DNA序列杂交。

5.如权利要求4所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器，其特征是，孵育的温度为体温。

6.如权利要求4所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器，其特征是，加入信号探针进行孵育前，采用牛血清白蛋白进行处理，减少非特异性吸附；

优选的，采用牛血清白蛋白；进行处理的过程为：将第一次孵育后的产物分散至含有牛血清白蛋白、NaCl、吐温-20的磷酸盐缓冲溶液；中进行处理；

优选的，采用牛血清白蛋白；进行处理的温度为体温，时间为0.5～1.5h。

7.一种权利要求1～6任一所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器在检测miRNA-155中的应用。

8.一种检测miRNA-155的试剂盒，其特征是，包括权利要求1～6任一所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器、核酸外切酶III。

9.一种检测miRNA-155的方法，其特征是，提供权利要求1～6任一所述的基于核酸识别诱导的荧光生物传感器或权利要求8所述的检测miRNA-155的试剂盒，将基于核酸识别诱导的荧光生物传感器与待测溶液混合，加入核酸外切酶III，孵育后，进行荧光检测。

10.如权利要求9所述的检测miRNA-155的方法，其特征是，孵育温度为体温，孵育时间为90～120min。