[发明专利]蛋白A包覆磁性纳米团簇以及制备方法及其在捕获抗体方面的应用

权利要求书

1.一种蛋白A包覆磁性纳米团簇，其特征在于：它的磁性单元是30-80nm小尺寸的四氧化三铁纳米团簇；所述蛋白A包覆磁性纳米团簇的制备方法是将水合三氯化铁，乙酸胺，乙二醇，聚丙烯酸和柠檬酸钠混合超声，利用微波辅助多元醇法制备富含羧基的小尺寸四氧化三铁纳米团簇，然后在磁性团簇表面通过活化负载蛋白A，制得所述蛋白A包覆磁性纳米团簇，具体步骤如下：

① 称取水合三氯化铁，乙酸胺溶于乙二醇中，水合三氯化铁与乙酸胺的摩尔比为1:3-1:5，超声后加入聚丙烯酸和柠檬酸钠，聚丙烯酸和柠檬酸钠分别固定为1.39 mmol和0.3mmol，继续超声，直到混合液变为亮红色，反应完全后方可进行后续的微波反应；

② 将①得到的溶液倒入微波反应管中，设定加热温度为220-260 °C，设定反应时间为30-60 min，进行微波反应，反应完毕后，得到黑色液体；用乙醇与去离子水交替离心洗涤三次，低压冷冻干燥后得到羧基化的Fe₃O₄纳米团簇；

③ 利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化Fe₃O₄纳米团簇的羧基；

④ 使用磷酸缓冲盐溶液洗涤活化后的磁性物质，磁分离，弃上清液；再加入蛋白A，蛋白A的浓度为1mg/mL，加入量的体积范围为50μL-100μL，在样品混合仪上室温震荡反应过夜，得到蛋白A包覆磁性纳米团簇。

2.用权利要求1所述的蛋白A包覆磁性纳米团簇进行捕获抗体的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

① 将两份荧光素标记的人免疫球蛋白G分别与PBS分散的磁性纳米团簇和蛋白A包覆磁性纳米团簇混合，室温下孵育，磁分离后进行荧光测试；

② 利用荧光光谱仪对蛋白A包覆磁性纳米团簇捕获抗体的能力进行检测，对比磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白G与蛋白A包覆磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白G的荧光强度；

③ 利用荧光电子显微镜对蛋白A包覆磁性纳米团簇捕获抗体的能力进行表观分析，对比磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白G与蛋白A包覆磁性纳米团簇连接荧光素标记的人免疫球蛋白G的荧光强度。