[发明专利]一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽在审
申请号: | 201911342820.8 | 申请日: | 2019-12-24 |
公开(公告)号: | CN111748596A | 公开(公告)日: | 2020-10-09 |
发明(设计)人: | 孙坤来;陈荫;赵玉勤;王斌;张译文 | 申请(专利权)人: | 浙江海洋大学 |
主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06;C07K1/16;C07K1/20;A23L33/18;A61K38/01;A61P1/16 |
代理公司: | 杭州知杭知识产权代理事务所(普通合伙) 33310 | 代理人: | 陈丽嫦 |
地址: | 316022 浙江省*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 具有 损伤 保护 作用 氧化 | ||
1.一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,包括以下步骤:
S1、桑葚制干:将新鲜采摘的桑葚冷冻干燥机内冻干,制得桑葚制干产品,待用;
S2、粉碎:将桑葚制干产品置于粉碎机中充分粉碎后过筛,制得桑葚粉末,待用;
S3、制备混合液:向桑葚粉末中添加氯化钠溶液,制得混合液,待用;
S4、制备桑葚酶解产物:用碱性蛋白酶酶解混合液,待用;
S5、分离:利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离,待用;
S6、进一步分离:以蒸馏水为洗脱液,流速0.5-0.8mL/min,收集洗脱组分并测定214nm波长处的吸光值,绘制洗脱曲线,收集洗脱峰,将具有抗氧化活性的峰,利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离,待用;
S7、冷冻干燥:在真空下冷冻干燥,制得抗氧化肽。
2.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S1中,所述冷冻温度为10-15℃,冷冻干燥时间为10-12h。
3.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S2中,粉碎后过60目筛。
4.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S3中,所述桑葚粉末和氯化钠溶液按照重量份为1:2的比例添加,所述氯化钠溶液的浓度为1.0%。
5.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S4中,所述酶解条件为:pH8.0-9.0、酶添加量3500-5000 U/g、底物浓度4%-5%w/v、解酶时间6-8h,沸水浴20-35min灭活,经8000-9000rpm离心20-30min,取上清液冷冻干燥,即为桑葚酶解产物。
6.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S5中,所述RP-HPLC的洗脱梯度为65-80min、10%-20% V乙腈,收集保留时间为40min的洗脱峰。
7.根据权利要求1所述的一种具有肝损伤保护作用的抗氧化肽,其特征在于,在步骤S7中,所述真空度为0-1.0MPa,冷冻干燥温度为10-20℃,冷冻干燥时间为18-20h。
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