[发明专利]一种CD55基因表达检测试剂盒

权利要求书

1.一种CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，包括针对CD55基因mRNA的茎环状捕获探针以及信号放大系统；所述信号放大系统包括有扩增探针和末端修饰有树状荧光基团的标记探针；其中，

(1)茎环状捕获探针：所述捕获探针为茎环状，用于连接CD55基因mRNA与扩增探针，每条捕获探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：茎部结构序列，能与CD55基因mRNA结合的特异性P1序列、间隔臂序列、P2序列；所述茎部结构序列可与P2序列3’端的碱基互补形成茎环结构；所述P2序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P4和CD55基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；所述针对CD55基因mRNA的茎环状捕获探针中，特异性P1序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10中的5条或5条以上，茎部结构序列为SEQ ID NO.21，P2序列为SEQ ID NO.23；

(2)扩增探针：所述扩增探针连接捕获探针与标记探针，每条扩增探针从5’端到3’端的碱基组成依次为：能与茎环状捕获探针的P2序列互补配对的P3序列、间隔臂序列、P4序列；所述P4序列为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配，与P1、P2、P3和CD55基因mRNA之间均不存在特异性结合的序列；所述针对CD55基因mRNA的扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.25，P4序列为SEQ ID NO.27；

(3)标记探针：所述标记探针连接扩增探针与树状荧光基团，每条标记探针具有与扩增探针P4序列互补配对的P5序列，且末端修饰有树状荧光基团；

所述针对CD55基因mRNA的标记探针中，P5序列为SEQ ID NO.29。

2.根据权利要求1所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括有针对内参基因mRNA的茎环状捕获探针以及信号放大系统；针对内参基因mRNA的茎环状捕获探针以及信号放大系统与针对CD55基因mRNA的茎环状捕获探针以及信号放大系统的结构相同，但标记探针的末端修饰的树状荧光基团互不相同。

3.根据权利要求2所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述内参基因为ACTB基因。

4.根据权利要求3所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述针对ACTB基因mRNA的茎环状捕获探针中，特异性P1序列选自SEQ ID NO.11～SEQ ID NO.20中的5条或5条以上，茎部结构序列为SEQ ID NO.22，P2序列为SEQ ID NO.24；针对ACTB基因mRNA的扩增探针中，P3序列为SEQ ID NO.26，P4序列为SEQ ID NO.28；针对ACTB基因mRNA的标记探针中，P5序列为SEQ ID NO.30。

5.根据权利要求1-4任一项所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述间隔臂序列的长度为5～10个碱基。

6.根据权利要求5所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述间隔臂序列为5～10个T。

7.根据权利要求1-4任一项所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述树状荧光基团的荧光染料选自：FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas、Red、LC RED640、Cy5、LCRED705、Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 750。

8.根据权利要求1-4任一项所述的CD55基因表达检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括有样本前处理组分，用于待检测细胞的富集；所述样本前处理组分包括单个核细胞分离管和含滤膜的过滤器；其中，

所述单个核细胞分离管包括管体和管塞，用于单个核细胞层的分离提取；所述管体内部从管底往上，依次为Ficoll-hyhaque分层液层、分离胶层和抗凝剂层；

所述含滤膜的过滤器用于待检测细胞的富集，所述滤膜选自聚碳酸酯滤膜、纤维滤膜、尼龙滤膜或塑料薄膜，且所述滤膜孔径为5～8μm。