[发明专利]一种基于血清N-糖指纹图谱鉴别肝硬化的方法

说明书

本发明属于临床医学诊断学领域，涉及血清糖蛋白N‑糖链糖组检测，具体涉及提供一种基于血清N‑糖指纹图谱鉴别肝硬化的方法，计算log(P2/P8)值。肝硬化是各类肝脏疾病的终末阶段，是全球第14大致死病因。目前肝硬化诊断的金标准是肝组织活检，其风险性及创伤性较大，使其临床应用受到限制。血清学标志物作为肝硬化患者非侵入检测手段受到临床的重视。在此基础上本发明提供了N‑糖谱鉴别肝硬化的方法及相应的检测系统，并将该检测方法与检测系统用于LC的早期筛查与诊断，相对于肝纤指标透明质酸及IV型胶原而言，其敏感度及特异度均有所提高，可认为log(P2/P8)是诊断LC的特征性血清学标志物。

技术领域

本发明属于临床医学诊断学领域，具体涉及一种检测血清N-糖log(P2/P8)的方法、检测系统及其应用。

背景技术

肝纤维化是由一种或多种病因长期反复作用形成的异常修复，导致肝脏弥漫型肝损害，其中肝硬化(liver cirrhosis，LC)作为晚期肝纤维化是各类肝脏疾病的终末阶段，目前肝硬化已经成为全球第14大致死病因，在大多数发达国家肝硬化的主要病因为丙型病毒性肝炎(hepatitis C virus，HCV)、酗酒以及越来越多的非酒精性肝病。而在我国，乙型病毒性肝炎(hepatitis B virus，HBV)感染是肝炎、肝硬化、肝癌的主要病因，每年有2.5％-3％慢性乙型肝炎发展为肝硬化。由于肝硬化的临床表现不典型，一般较难诊断，而且大部分患者在就诊时已发展到严重阶段，甚至已出现肝细胞癌，从而导致患者治疗困难、预后较差。因此，建立肝硬化检测的有效方法，以期做到早发现、早诊断、早治疗对提高患者的生存率具有重要的现实意义。

目前而言，肝硬化诊断的金标准是肝组织活检，但其风险性及创伤性较大，使得临床的应用受到限制。当前，临床上除了依靠超声检查外，主要依靠检测患者的肝功能来进行推测判定。有研究发现，多种血清学标志物在肝硬化患者中增高，血清学标志物作为肝硬化患者非侵入检测手段，由于其检查手段的便捷性和经济性，越来越受到临床的重视。

蛋白质、核酸和糖是构成生命的三大类物质，随着人类基因组计划的完成及蛋白质组学技术发展，糖组学研究继而兴起，这为寻找疾病新的血清学标志物提供了契机。糖基化是最常见的蛋白翻译后修饰形式，体内蛋白质近70％为糖蛋白，其具有广泛的生物学意义，如影响细胞发育、分化和形态维持，参与细胞免疫和细胞间识别，组成血型抗原，作为恶性细胞标记等。而糖链的这些功能同时也是其与多种疾病相关的基础，在急性慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤等疾病的发生发展过程中均可发现糖蛋白的糖链组成或糖基化程度的改变。近年来随着分子生物学技术的不断发展，逐渐产生快速、高敏感性和高通量获取N-糖组图谱的方法，对肝硬化和肝癌的诊断有着重要的价值。基于毛细管电泳的N-糖指纹图谱(N-glycan Fingerprint，NGFP)，具有简便、高效、高通量以及技术稳定、灵敏度高等特点。

本发明基于NGFP技术，在病例-对照(case-control)研究中根据N-糖指纹图谱中的特定结构糖型和丰度log对数比，对LC患者和CHB及健康体检人群进行鉴别诊断。该方法对于LC患者的早期诊断具有重要的价值，可以使患者得到及时有效的治疗，阻断患者肝炎-肝硬化-肝癌的发展进程，从而改善患者的预后并提高其生活质量。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于N-糖指纹图谱提示的特定糖型和丰度数据，筛选得到具有显著变化的几种糖链结构及丰度，计算并比较其中差异显著的糖链结构丰度log对数比值，对LC和non-LC(CHB及健康体检人群)进行鉴别诊断，以期望其可在LC的辅助诊断及临床高危预警中发挥作用。

具体而言，在第一方面，本发明提供了一种基于LC和CHB及健康体检人群的特征性N-糖指纹图谱，在比较LC、CHB、健康体检人群N-糖链结构丰度，计算并比较其中差异显著的N-糖链结构丰度，优选差异最大的log(P2/P8)作为鉴别LC和non-LC(CHB及健康体检人群)的N-糖血清学标志物。