[发明专利]一种童康片中间品有效成分的液质联用检测方法

权利要求书

1.一种童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(一)待测样品的预处理

取童康片中间品加入甲醇进行超声提取，放冷，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；

(二)设定液质联用条件

(1)色谱分离条件的设定：使用的色谱柱为C18填料，1.9μm粒径，2.1×100mm规格；流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液，梯度洗脱，流速为0.2ml/min，柱温40℃，各成分检测波长为260nm，进样量为10μL；

(2)质谱检测条件的设定：电离源模式为电喷雾离子化，电离源极性为正模式，喷雾电压为3503V，毛细管温度为300℃，鞘气压为55Arb，辅助气压为10bar，碰撞电压为35V，扫描时间为0.1s，碰撞压力为1.5mTorr，多反应监测；

(三)标准溶液的配制和标准曲线的建立

精密称取对照品，加甲醇溶解，定容后作为储备液；精密吸取储备液，制备成一系列梯度浓度的标准品溶液，采用上述液质联用条件对不同浓度的标准品溶液进行测定，建立标准曲线，得到线性方程；

(四)方法学验证

进行精密度和加样回收率考察及进行样品稳定性和重复性分析；

(五)童康片中间品的检测

将所述供试品溶液采用上述液质联用条件进行测定，从色谱图上测得所述供试品溶液的定量离子的峰面积，代入所述标准曲线，获得童康片中间品的有效成分的浓度。

2.根据权利要求1所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，所述童康片中间品由山药、陈皮、黄芪、白术、防风和牡蛎提取浓缩所得，所述童康片中间品的有效成分为升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷。

3.根据权利要求1所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，在待测样品的预处理步骤中，超声辅助提取时间为30min，超声频率为40KHz，在室温条件下提取。

4.根据权利要求1所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的采集时间为15min。

5.根据权利要求4所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，流动相A为乙腈，流动相B为0.1％甲酸水溶液，所述梯度洗脱条件为：0.00min，12％A+88％B；1.50min，19％A+81％B；4.17min，19％A+81％B；6.00min，34％A+66％B；8.17min，34％A+66％B；10.34min，55％A+45％B；11.00min，95％A+5％B；12.50min，95％A+5％B；13.00min，88％A+12％B；15.00min，88％A+12％B。

6.根据权利要求1所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，所述对照品为升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷。

7.根据权利要求1所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，用于定量分析升麻素苷的离子反应为m/z469.090→m/z 258.800，选择的离子对为469.090→258.800；用于定量分析毛蕊异黄酮葡萄糖苷的离子反应为m/z 447.03→m/z 269.800，选择的离子对为447.03→269.800；用于定量分析5-O甲基维斯阿米醇苷的离子反应为m/z453.090→m/z 242.800，选择的离子对为453.090→242.800。

8.根据权利要求1所述的童康片中间品有效成分的液质联用检测方法，其特征在于，在精密度考察中，通过精密吸取含升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷三种有效成分的混合对照溶液10μl，连续进样6次，按所述液质联用条件测定，计算三种有效成分的峰面积，并分别计算出相对标准偏差RSD。