[发明专利]一种固液相结合制备布美诺肽的方法

说明书

本发明公开了一种固液相结合制备布美诺肽的方法。本发明制备布美诺肽的方法，通过液相法合成AC‑Nle‑Asp‑O‑2‑Phipr二肽片段，在Lys的主链和侧链分别进行偶联延长肽序，得到Fmoc‑His(Boc)‑D‑Phe‑Arg(pbf)‑Trp(Boc)‑Lys(AC‑Nle‑Asp‑O‑2‑Phipr)‑王树脂，切除保护基后主链和侧链进行环化，避免了首尾折叠成环，解决了折叠成环位阻大的问题，并且由于成环位点更接近，已成环的肽对未成环的肽的影响也降低至最小。并且本发明不采用碱进行水解，不会产生相应的杂质。本发明布美诺肽的合成方法合成布美诺肽纯度高、成本低，适合规模化生产的布美诺肽。

技术领域

本发明涉及一种固液相结合制备布美诺肽的方法，属于多肽合成技术领域。

背景技术

布美诺肽，英文名Bremelanotide，最初由亚利桑那大学研究开发，作用靶点为MC3R/MC4R，结构属于肽类似物，用于治疗绝经前女性性欲障碍；Paladin公司于2007年获得该化合物的研发权利，随后进入开发，临床研究集中于北美；2018年3月向美国FDA提交了NDA申请，2019年6月21获FDA批准上市。布美诺肽由7个氨基酸组成，与α-促黑素细胞激素具有相同的核心序列，后者的受体在食欲及性欲唤起中起重要作用。其肽序为AC-Nle-[Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys]cycle-OH，结构式如下：

布美诺肽是由7个氨基酸组成的环肽，其合成的技术难点在于成环。目前布美诺肽的合成技术根据成环方法可分为两类，一类是液相中成环，一类是树脂上成环。在液相中成环容易产生大量分子间偶联产物，生成二肽，三肽等副反应，影响收率；为了抑制副反应的生成，必须降低反应浓度，会产生大量的废水，不利于环保；并且操作比较麻烦。因此，固相成环方法的研究更值得探索。

目前，布美诺肽的合成方法主要为固相合成法。固相成环主要是偶联完主链后脱去保护，肽链首尾相连，但是肽链因空间位阻太大，难以折叠至首尾相连，因而导致效率不高，导致空间位阻大的主要原因包括以下两个方面：(1)肽链上的各种保护基结构，使得肽链具有刚性结构，难以折叠回来成环；(2)成环以后，环肽在树脂上具有了更大的空间结构，使得未成环的肽难以折叠回来成环。专利CN200610086841.4采用逐步合成的方法，肽树脂合成结束后，选择性脱除Asp及Lys的保护基，之后在树脂上成环，最后以HF裂解，因为HF的剧烈腐蚀性而导致该方法无法大规模使用，其实施例公布的精肽收率为30～35％；专利CN200710048824.6同样采用选择性脱保护的方法，但其所选择的的脱保护方法在脱除Asp及Lys侧链保护基的同时也会脱除His的保护基Trt，其实施例公布的粗肽收率为80％；专利CN200910131598.7布美诺肽的固相合成方法中将对羟基苯甲酸连接在RinkAmideResin之后，再采用普通氨基酸原料逐步合成，合成结束后以TFA裂解，在液相条件下成环，但是在进行液相成环时容易发生分子间偶联，产生二聚体，三聚体等多聚物，严重降低合成收率；专利201610070195.6中将HO-(CH2)n-COOH作为连接固相载体与目标肽的linker，在树脂上成环，该方法改造了树脂的linker结构，在羧基端引入长链脂键，克服了空间位阻大的第二个原因，但是难以折叠成环的问题并没有太好的作用，并且在切除脂键的过程中用到了碱性溶液，溶液产生各种降解杂质，影响收率和纯度。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种固液相结合制备布美诺肽的方法，通过液相法合成AC-Nle-Asp-O-2-Phipr二肽片段，在Lys的主链和侧链分别进行偶联延长肽序，得到Fmoc-His(Boc)-D-Phe-Arg(pbf)-Trp(Boc)-Lys(AC-Nle-Asp-O-2-Phipr)-王树脂，切除保护基后主链和侧链进行环化，避免了首尾折叠成环，解决了折叠成环位阻大的问题，并且由于成环位点更接近，已成环的肽对未成环的肽的影响也降低至最小。

本发明的第一个目的是提供一种固液相结合制备布美诺肽的方法，包括如下步骤：