[发明专利]人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法

说明书

本发明公开了一种人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，一、标准溶液的标定(a)标准工作液的配制：伊马替尼标准工作液的配制；去甲伊马替尼标准工作液的配制；(b)用标准溶液的标定，得到标准曲线方程：伊马替尼标准曲线方程；去甲伊马替尼标准曲线方程；二、(c)检测血液的离心处理；三、(d)待测样品的有机处理；四、(e)待测样品的检测。采用二维液相色谱法同时监测人血浆中伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度，具有可操作性强、快速、灵敏、具有良好重现性、且监测成本较低的优点。

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，具体来说，涉及一种人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法。

背景技术

伊马替尼(Imatinib mesylate，IM)是一种小分子蛋白酪氨酸酶(TKIs)抑制剂，分子式为C₂₉H₃₁N₇O.CH₄SO₃，可以很好的抑制BCR-ABL酪氨酸激酶(TK)及c-Kit等的活性，其作为靶向药物应用于慢性粒细胞白血病、不可切除/或发生转移的胃肠间质瘤、急性淋巴细胞白血病等。该药经口服，生物利用度为98％，高脂饮食可略微降低其吸收。主要经肝脏代谢，粪便排泄。研究发现，IM作为口服小分子靶向药物，存在巨大的个体内差异(约75％)及个体间差异(60％)，且不同种族和地域之间患者的IM血药浓度存在差异，浓度有效阈值也存在区别。伊马替尼在人体内主要循环代谢产物是N-{4-甲基-3-[(4-吡啶-3-嘧啶-2-基)氨基]苯基}-4-(哌嗪-1-甲基)-苯甲酰胺(去甲伊马替尼)，其药效与原研药相似，故伊马替尼及其代谢产物在血液样本中的浓度检测在临床精准个体化治疗中具有重要意义。

目前，IM血药浓度监测尚未在国内临床实践中广泛开展，关于IM血药浓度监测的方法只有高效液相色普法(HPLC)、质谱法(MS)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)等。HPLC法，重现性较差，且血液样品前处理过程复杂；而MS及LC-MS/MS所用质谱仪昂贵，液质的“基质效应”影响因素大，重现性低且对操作人员要求较高。二维液相色谱法较HPLC精度高、重现性好，较MS及LC-MS/MS，无“基质效应”。且使用本发明方法，可大体积进样，提高灵敏度和准确度；除此之外，本发明所采用的待测样品处理步骤简单、操作简便，有机处理剂沉淀蛋白离心后上清液可直接进样，无需氮吹、复溶、萃取等操作。且本专利所述方法可同时对人血浆中IM及其代谢物(去甲伊马替尼)进行监测。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种人血浆中同时测定伊马替尼及伊马替尼代谢物浓度的方法，

一、标准溶液的标定

(a)标准工作液的配制：

伊马替尼标准工作液的配制：精确称取伊马替尼标准品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到标准储备液A，将标准储备液A用50％的甲醇进行稀释，分别在含有130-14000ng/mL伊马替尼的浓度范围内配制出六种标准工作液，并在-20℃条件下保存；

伊马替尼代谢物(去甲伊马替尼)标准工作液的配制：精确称取去甲伊马替尼标准品5mg置于5mL容量瓶，用50％甲醇的水溶液溶解并定容于5mL,得到标准储备液B，将标准储备液B用50％的甲醇进行稀释，分别在含有130-14000ng/mL去甲伊马替尼的浓度范围内配制出六种标准工作液，并在-20℃条件下保存；

(b)用标准溶液的标定，得到标准曲线方程：