[发明专利]一种B群流脑fHbp-V3重组蛋白及其制备方法，疫苗组合物，用途

说明书

本发明提供了一种中国B群流脑fHbp‑V3重组蛋白疫苗抗原及其制备方法，所述疫苗的抗原蛋白基因来自中国流行的B群流脑fHbp‑V3菌株，所述的fHbp‑V3抗原蛋白免疫血清产生的针对自身抗原的结合抗体的平均滴度为48500，同时可以诱导产生针对fHbp‑V3菌株的杀菌抗体反应，进一步的确证实验中fHbp‑V3抗原诱导血清可以产生针对B群流脑fHbp‑V2和fHbp‑V3菌株的杀菌抗体反应，可以作为预防fHbp‑V2和fHbp‑V3基因的中国流行B群流脑菌株感染引起的感染。

技术领域

本发明属于疫苗领域，具体涉及一种B群流脑fHbp-V3重组蛋白，该重组蛋白的氨基酸序列，编码该重组蛋白的基因，包含该重组蛋白的疫苗组合物，该重组蛋白的制备方法，该重组蛋白在制备预防B群流脑菌株感染导致的脑脊髓膜炎或菌血症疾病的疫苗中的用途。

背景技术

流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）属于我国规定的乙类传染病，是一种由革兰氏阴性的奈瑟双球菌导致的以急性脑脊髓膜炎和败血症为主要症状的通过呼吸道传播的传染病，婴幼儿和青少年是发病的主要人群，脑膜炎奈瑟球菌通常不会导致疾病，以无症状的形式在人体的鼻咽部定植，在某些情况下可以导致脑脊髓膜炎和菌血症。我国流脑的发病率已经下降到了0.01/10万以下，中国疾控预防控制中心发布的2018年中国法定传染病数据显示中国的流脑发病率为0.0075/10万，致死率为8-15％。

根据其荚膜多糖的性质可以将流脑分为13个血清群，其中A、B、C、W和Y血清群是主要的流行菌群，超过95％的流脑感染病例是由这些血清群感染导致的。其中A、C、W、Y群流脑的相应的荚膜多糖疫苗和多糖结合疫苗已经上市销售，用于预防这四种流脑血清群的感染。而B群流脑因为其荚膜多糖是人体细胞的唾液酸酰基蛋白的类似物导致其免疫原性低，不能用于研究B群流脑疫苗。

fHbp是位于流脑外膜的一种可以结合H因子的脂蛋白，H因子在补体系统中具有重要的作

用，fHbp可以通过结合H因子的方式逃避免疫系统对流脑菌株的杀伤作用，是一种重要的B群流脑疫苗抗原。根据fHbp的蛋白序列，fHbp主要分为3个变异群V1、V2和V3，每个变异群内fHbp抗原的同源性为91.6-99％，不同变异群间fHbp抗原的同源性最低为62.8％。根据中国疾控中心关于B群流脑的研究数据显示中国与欧美地区流行B群流脑菌株的fHbp基因是不同的，欧美地区流行菌株的fHbp基因主要是V1，占流行菌株的70％，中国流行B群流脑菌株的fHbp基因主要是V2。

欧美地区已经有2个上市的B群流脑疫苗产品，一个疫苗包含两种fHbp抗原蛋白，分别是fHbp-V1.45和fHbp-V3.55，另一个疫苗也包含fHbp-V1.1的蛋白，这三种fHbp的蛋白在中国B群流脑菌株中均未发现，所以筛选中国流行B群流脑菌株的fHbp抗原蛋白对于研制符合中国B群流脑流行情况的疫苗具有重要作用。

发明内容

本发明提供一种B群流脑fHbp-V3重组蛋白，具有如seq ID NO.1所示的氨基酸序列。

本发明提供一种B群流脑fHbp-V3基因序列，编码如权利要求1所述B群流脑fHbp-V3重组蛋白。

优选的，上述的B群流脑fHbp-V3基因序列，其核苷酸序列如seq ID NO.2所示。

优选的，上述的B群流脑fHbp-V3基因序列，根据大肠杆菌的密码子偏好性进行密码子优化后合成后的核苷酸序列如seq ID NO.3所示。

本发明提供一种疫苗组合物，其特征在于，包括上述的B群流脑fHbp-V3重组蛋白及作为佐剂的氢氧化铝、完全弗氏佐剂、或不完全弗氏佐剂。

优选的，所述的B群流脑fHbp-V3重组蛋白含量为200ug/ml。

优选的，所述氢氧化铝佐剂的含量为1mg/ml。