[发明专利]一种检测短链脂肪酸的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种检测短链脂肪酸的试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板、短链脂肪酸标准品梯度溶液、样品稀释液、碱性磷酸酶标记的检测抗短链脂肪酸结合物的抗体、20×浓缩洗涤液、显色剂、终止液及封板膜、密封袋和说明书；其中，所述酶标板为透明聚苯乙烯96或48孔酶标板，且其各孔包被有浓度为5μg/mL的抗短链脂肪酸单克隆抗体Mab1；所述短链脂肪酸标准品梯度溶液有6个浓度的溶液，分别为20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0ng/mL。本发明的检测试剂盒提供了一种以碱性磷酸酶(ALP)标记的酶标二抗，显著提高了试剂盒的稳定性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及一种检测胃肠菌群代谢产物的试剂盒，尤其涉及一种检测短链脂肪酸(SCFAs)的以碱性磷酸酶(ALP)做标记物的酶联免疫检测试剂盒及其应用。

背景技术

短链脂肪酸(Short-chain fatty acids，SCFAs)是由益生菌，主要是肠道厌氧益生菌发酵膳食纤维和部分氨基酸和蛋白质的终产物，主要包括乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸和己酸等。短链脂肪酸不仅能为机体细胞提供能量，同时具有抑制致病菌、抑制肠道上皮细胞和骨髓细胞的炎症反应等作用，并可以调节机体代谢平衡，降低炎症性肠病、肥胖和II型糖尿病等疾病的发生率。

目前关于肠道菌群的重要作用已有明确证实，对于其详细机制的研究也在逐渐开展，也有证据显示SCFA是介导肠道菌群有益作用的重要效应分子。因此，针对短链脂肪酸实施进一步检测对于肠道健康具有重要意义。

现有技术中，气象色谱法是最常用的短链脂肪酸检测方法，但气象色谱法设备复杂、昂贵，使用成本高；操作复杂，人员需要专职培训，操作繁琐。因此其难以在常规工作和基层实验室中推广，应用受到极大的限制。除气相色谱法外，相关的酶联免疫试剂盒也开始获得关注，但检索国家食品药品监督管理总局网站，国产试剂和进口试剂均未搜索到短链脂肪酸检测试剂盒注册文号。文献报道的相关酶联免疫试剂盒均为辣根过氧化物酶(HRP)标记物，该标记物较不稳定，试剂盒灵敏度不高。有关以碱性磷酸酶(ALP)做标记物、既操作简单且标记物稳定、灵敏度高的检测短链脂肪酸试剂盒的酶联免疫检测试剂盒还未见报道。

发明内容

针对现有技术中气象色谱法检测设备复杂、昂贵，且操作繁琐，难以在常规实验室工作或在基层实验室中推广的不足，本发明的目的在于提供一种检测短链脂肪酸(SCFAs)的以碱性磷酸酶(ALP)做标记物的酶联免疫检测试剂盒及其应用，以克服现有酶联免疫试剂盒不稳定和灵敏度较低的缺陷。

本发明所述的检测短链脂肪酸的试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板、短链脂肪酸标准品梯度溶液、样品稀释液、碱性磷酸酶(ALP)标记的检测抗短链脂肪酸结合物的抗体、20×浓缩洗涤液、显色剂、终止液及封板膜、密封袋和说明书；

其特征在于：

所述酶标板为透明聚苯乙烯96或48孔酶标板，且其各孔包被有浓度为5μg/mL的抗短链脂肪酸单克隆抗体Mab1；

所述短链脂肪酸标准品梯度溶液有6个浓度的溶液，以如下方法制得：按乙酸:丙酸:丁酸:戊酸:己酸＝60mg/ml:25mg/ml:14mg/ml:0.5mg/ml:0.5mg/ml的比例，制备模拟血清中的短链脂肪酸标准品；再配制含5wt％牛血清白蛋白、0.85wt％氯化钠的pH＝7.0的1.0mmol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠的缓冲液获得标准品缓冲液；再以标准品缓冲液制备标准品浓度梯度为20ng/mL、10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0ng/mL的6个标准品溶液，其中0ng/mL为标准品缓冲液；