[发明专利]一种测定婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素及其同系物的HPLC-MS/MS方法

说明书

本发明提出了一种测定婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素及其同系物的HPLC‑MS/MS方法，包括如下步骤:配制标准品工作液；婴幼儿辅助食品样品的处理；将标准品工作液和婴幼儿辅助食品待测样品分别用HPLC‑MS/MS进行检测，分别得到色谱图和质谱图；对得到的色谱图和质谱图进行处理，对八种黄曲霉毒素及其同系物进行定性、定量检测，分别得到婴幼儿辅助食品待测样品的中八种黄曲霉毒素及其同系物质量浓度，然后计算得到婴幼儿辅助食品待测样品中八种黄曲霉毒素及其同系物的含量。本发明适用全面，灵敏度高，简便快速，只需流程化浓缩净化即可对婴幼儿食品中的八种黄曲霉毒素及其同系物同时定性定量分析。

技术领域

本发明涉及真菌毒素测定技术领域，尤其是涉及一种测定婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素及其同系物的HPLC-MS/MS方法。

背景技术

黄曲霉毒素是一类含有二氢呋喃香豆素化学结构相似的化合物，属于真菌毒素，是由寄生曲霉菌、黄曲霉菌和毛曲霉等在特殊环境下产生的次级代谢产物。寄生曲霉菌和黄曲霉菌广泛的存在于自然界和农作物上，在阴暗潮湿条件下很容易生长产生黄曲霉毒素，文章报道已发现的黄曲霉毒素有20种，其中AFB₁是众所周知化学物质中致癌性最强的一种，AFM₁是AFB₁的羟基化代谢物，存在于被污染的牛奶、奶粉甚至母乳中，毒性略低于前者，但仍然是砒霜的40倍，氰化钾的5倍。标准GB 2761-2017《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》规定，婴幼儿辅助食品中AFB₁和AFM₁均不得超过0.5 μg·kg^-1。只要具有二氢呋喃香豆素化学结构的黄曲霉毒素类似物都有毒性，我国目前主要监管食品中AFB₁和AFM₁，则不能对黄曲霉毒素的危害进行综合评估，而其它黄曲霉毒素AFB₂、AFG₁、AFG₂、AFB₂代谢物AFM₂，以及黄曲霉毒素合成的前体MST、ST都具有类似结构，对人类毒性及致癌性极强，例如ST属于2B类致癌物质，与肝癌和肺癌密切相关。婴幼儿辅助食品主要原料是米粉、低筋面粉、玉米淀粉、奶粉、蛋清、牛奶和黄油，以及少量的水果和色素等，若原材料受到黄曲霉毒素污染，由于其化学性质稳定不易分解，则婴幼儿辅助食品中也会污染毒素。耿建强等课题组在2015-2016年间采集141份市售婴幼儿营养米粉, 黄曲霉毒素B1检出9份，检出率为6.4%，含量范围在0. 11- 0. 25 μg/kg之间。2017年，国家食药总局组织抽检6类食品412批次样品，其中一款婴幼儿谷物辅助食品中黄曲霉毒素B1检出值为0.8μg/kg，比标准规定(不超过0.5μg/k g)高出60%，充分说明污染AFB₁的农作物或食品中同样存在毒素ST和MST的风险。婴幼儿属于特殊敏感群体，食用受黄曲霉毒素污染的食品会造成不可逆的伤害，因此有必要建立全面的黄曲霉毒素检测方法，从而使婴幼儿真正减少食用黄曲霉毒素及其同系物的风险，创造一个更加安全的婴幼儿食品环境。

目前，现有技术检测食品常采用酶联免疫法和高效液相色谱法，酶联免疫法属于快速筛查检测方法，前处理方法简单、半小时内就能出检测结果，但易受基质干扰出现假阳性，对于多种毒素同时检测方法不成熟。高效液相色谱法的准确度和稳定性要优于酶联免疫法，但在检测同类性质相近化合物时分析困难，对于保留时间相近的化合物容易带来误判，同时处理通量受到限制，灵敏度低。

发明内容

本发明提出一种测定婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素及其同系物的HPLC-MS/MS方法，该方法适用全面，灵敏度高，简便快速，只需流程化浓缩净化即可对婴幼儿食品中的八种黄曲霉毒素及其同系物同时定性定量分析，特别适合婴幼儿辅助食品生产企业及政府相关监管部门使用。

本发明的技术方案是这样实现的：一种测定婴幼儿辅助食品中黄曲霉毒素及其同系物的HPLC-MS/MS方法，包括如下步骤:

S1、配制标准品工作液；