[发明专利]一种单个哺乳动物细胞纳米封装方法及所得封装细胞

权利要求书

1.一种单个哺乳动物细胞纳米封装方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将带正电荷封装基质溶于生理盐水或PBS溶液中制备质量浓度为0.5~1.5mg/mL的带正电荷封装基质溶液；将带负电荷封装基质溶于生理盐水或PBS溶液中制备质量浓度为0.5~1.5mg/mL的带负电荷封装基质溶液；

（2）将哺乳动物细胞的单细胞悬液加入到步骤（1）制得的带正电荷封装基质溶液中，4~10℃下反应5~10min并保持轻微振荡，之后离心收集细胞并洗涤，然后再将洗涤后的细胞重悬于步骤（1）制得的带负电荷封装基质溶液中得到细胞重悬液，并向细胞重悬液中加入谷氨酰胺转胺酶使其终浓度为0.01~0.2U/mL，4~10℃下反应5~10min并保持轻微振荡，之后离心收集细胞并洗涤，得到封装层数为2层的封装细胞；

（3）循环上述步骤（2）n次，n＞1，得到封装层数为2n层的封装细胞，并制成封装层数为2n层的封装细胞悬液；

（4）向封装层数为2n的封装细胞悬液中加入谷氨酰胺转胺酶，使其终浓度为（0.01~0.2）×n U/mL，20~37℃下交联反应20~120min并保持轻微振荡，之后离心收集细胞并洗涤，得到表面封装层数为2n层的哺乳动物单细胞；

步骤（1）所述带正电荷封装基质采用由购买的来自牛皮的B型明胶先在水溶性碳化二亚胺的催化作用下经乙二胺改性后，再经透析膜纯化后得到带正电荷的明胶；

带正电荷的明胶的具体制备方法为：称取1.0g B型明胶溶于50mL的0.1M PBS缓冲液中，随后加入4mL乙二胺和1.0g的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀后，用5M的HCl将溶液pH调至5.0，随后将混合溶液置于37℃水浴锅中缓慢搅拌反应18h，反应完成后，将溶液装入预处理过的截留分子量8000~14000 Da的透析袋中，在37℃水浴锅中温和搅拌，每12h更换一次去离子水，透析3~4天后，对上述明胶溶液进行冻干处理，即得带正电荷的明胶；

步骤（1）所述带负电荷封装基质采用由购买的来自牛皮的B型明胶经透析膜纯化后得到的带负电荷的明胶；

所述带负电荷的明胶的具体制备方法为：称取2.5g B型明胶溶于50mL的0.1M PBS缓冲液，随后将溶液装入预处理过的截留分子量8000~14000 Da的透析袋中，在37℃水浴锅中温和搅拌，每12h更换一次去离子水，透析3~4天后，对上述明胶溶液进行冻干处理，即得带负电荷的明胶。

2.根据权利要求1所述的一种单个哺乳动物细胞纳米封装方法，其特征在于：步骤（2）所述的哺乳动物细胞的单细胞悬液中哺乳动物细胞的含量为1×10⁵~2×10⁶个/mL。

3.根据权利要求1所述的一种单个哺乳动物细胞纳米封装方法，其特征在于：所述步骤（3）中n=2~6，即循环步骤（2）2~6次，得到封装层数为4~12层的封装细胞，并制成封装层数为2n的封装细胞悬液。

4.根据权利要求1~3中任一项中所述的一种单个哺乳动物细胞纳米封装方法所制得的哺乳动物封装细胞。