[发明专利]一种测定旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸含量的方法

说明书

本发明公开了一种测定旋覆花中1,3‑二咖啡酰奎宁酸含量的方法，属于中药有效成分含量检测技术领域。通过加热回流提取旋覆花中有效成分1,3‑二咖啡酰奎宁酸，以作为供试品溶液，再与对照品溶液均经高效液相色谱仪进行测定，可实现对旋覆花中有效成分1,3‑二咖啡酰奎宁酸的定性和定量检测，且本检测限可达0.23μg/ml；本方法具有操作简便、稳定性高、重复性好、专属性强等特性，为后续旋覆花中1,3‑二咖啡酰奎宁酸的定性定量的研究，以及产品质量控制、评价指标建立等提供可靠的检测方法。

技术领域

本发明是一种测定旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸含量的方法，具体涉及一种采用高效液相色谱法测定旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸含量的方法，属于中药有效成分含量检测技术领域。

背景技术

咖啡酰奎宁酸类化合物，是一类由奎宁酸与数目不等的咖啡酸通过酯键连接而成的酚酸类天然成分，广泛存在于植物界如金银花、杜仲、百花刺参、旋覆花、山银花等中药植物中。具有抗氧化、抗炎、抗菌抗病毒、细胞保护、免疫调节、抗高血糖高血脂和抗癌等药理活性。以旋覆花为例，旋覆花为菊科植物旋覆花或欧亚旋覆花的干燥头状花序，主要用于治疗风寒咳嗽，痰饮蓄结，胸膈痞满，喘咳痰多，呕吐噫气，心下痞硬等病症，具有降气，消痰，行水，止呕的功效。

近年来，随着对旋覆花中咖啡酰奎宁酸类化合物药理活性的深入研究，人们发现，旋覆花中所含的咖啡酰奎宁酸类化合物具有多方面的生物活性，以专利号为CN201110112717.1，发明名称为咖啡酰奎宁酸类化合物的专利文献为例，其中提到，咖啡酰奎宁酸类化合物的用途一方面是作为流感病毒RNA 聚合酶抑制剂和预防的应用，另一方面是其在制备预防和/或治疗与流感病毒RNA 聚合酶相关疾病的药物的应用，特别是在制备抗流感药物中的应用和在制备抗禽流感病毒(H5N1) 的药物中的应用。由此可见旋覆花中咖啡酰奎宁酸类化合物在抗流感药物开发过程中具有巨大的潜在价值。我们知道，旋覆花中含有多种咖啡酰奎宁酸类化合物，开发和挖掘旋覆花中不同咖啡酰奎宁酸类化合物的药效和作用，将作为当前旋覆花新药开发的一个切入点。王彩芳等在“HPLC法测定线叶旋覆花中1,5-二咖啡奎宁酸含量”（药物研究，2008年9月5卷第25期，32-33）中建立了以高效液相色谱法测定线叶旋覆花中有效成分1,5-二咖啡奎宁酸含量的方法，1,5-二咖啡奎宁酸具有保护肝细胞、抗肝损伤、抗肝纤维化等方面的显著作用，为旋覆花的生产开发和质量控制提供科学依据。

1,3-二咖啡酰奎宁酸具有增强胆汁降低脂肪，肝脏解毒，预防脂肪肝；能有效抑制LDL胆固醇氧化，降低胆固醇；有护肝作用，能修复受损肝细胞等作用，常应用于减肥降脂配方，护肝及解酒药中使用。已有研究表明，1,3-二咖啡酰奎宁酸是旋覆花的主要成分，但目前却鲜有关于旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸的含量检测、分离纯化的研究报道。2015版《中国药典》中也未记载有关于旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸的鉴定和含量测定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种测定旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸含量的方法，采用加热回流方式提取旋覆花中有效成分，以作为供试品溶液，再与对照品溶液均经高效液相色谱仪进行测定，可实现对旋覆花中有效成分1,3-二咖啡酰奎宁酸的定性（鉴别）和定量（含量）检测，且本检测限可达0.23μg/mL；本方法具有操作简便、稳定性高、重复性好、专属性强等特性，为后续旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸的定性定量的研究，以及产品质量控制、评价指标建立等提供可靠的检测方法。

本发明通过下述技术方案实现：一种测定旋覆花中1,3-二咖啡酰奎宁酸含量的方法，包括以下步骤：

A．称取1,3-二咖啡酰奎宁酸对照品，采用30%甲醇为溶剂，以浓度梯度配制至少五份对照品溶液；

B．将经步骤A配制的至少五份对照品溶液分别进样于高效液相色谱仪中，经测定，得各对照品溶液对应的色谱图；

C．以各对照品溶液的浓度为横坐标，对应色谱图中1,3-二咖啡酰奎宁酸色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程；