[发明专利]抗PD1和TGFβ的双功能抗体及其制备方法，以及含有其的药物组合物

说明书

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及涉及一种抗PD1和TGFβ的双功能抗体及其制备方法，以及含有其的药物组合物。该双功能抗体包含靶向PD‑1的第一蛋白功能区和靶向TGFβ的第二蛋白功能区；所述第一蛋白功能区为PD‑1抗体，所述第二蛋白功能区为TGFβRII的胞外结构域；所述第一蛋白功能区的抗体重链C端和所述第二蛋白功能区的N端连接。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种抗PD1和TGFβ的双功能抗体及其制备方法，以及含有其的药物组合物。

背景技术

传统的癌症治疗方案以放疗和化疗为主，化疗和放疗因为缺乏靶向性，在杀伤癌细胞的同时，对正常组织也有很强的杀伤作用。此后，在化疗基础上研究发展出了靶向治疗，靶向治疗主要针对对肿瘤存活和生长具有重要性的过表达蛋白或原癌基因。靶向治疗虽然有效减少了，存在诸如耐药、脏器毒性等一系列弊端。

癌症免疫治疗是新兴的癌症治疗概念，其通过激活免疫系统或解除免疫系统的抑制，重整宿主免疫应答，尤其是适应性T细胞应答，提供免疫监视、杀伤癌细胞。特异性更好，还可实现长期保护性免疫。

2011年，FDA批准用于治疗黑色素瘤的抗CTLA-4抗体伊匹单抗(ipilimumab)，开启了免疫治疗的新纪元。关于抗PD-1或抗PD-L1疗法在临床试验中诱导黑色素瘤、肾癌和肺癌中的持久的应答的证据进一步预示着靶向肿瘤免疫抑制通路的疗法成为临床新的中心思路。抑制PD-1/PD-L1相互作用会导致对于耗竭T细胞中现存的长期免疫应答的去抑制，然后抗PD-1治疗有时会导致可能致命的肺相关的自身免疫负面事件。而且PD-1/PD-L1疗法的临床响应率只有约20％。持续提高PD1/PDL1疗法的治疗活性，减少其毒性已逐渐成为免疫治疗剂开发中的核心目标。然而，PD1/PDL1免疫疗法也存在很多问题，例如在很多癌症中的临床响应率仅为15％～20％，且Merck公司的PDL1抗体临床用药量为1200mg/次/3周，用药剂量很高；此外，肿瘤细胞会释放含PDL1的外泌体，中和肿瘤微环境中的PDL1抗体，也会影响其作用效果。

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是属于调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。这一家族除TGF-β外，还有活化素、抑制素、缪勒氏管抑制质和骨形成蛋白。机体多种细胞均可分泌非活性状态的TGF-β。在体外，非活性状态的TGF-β又称为latency associated peptide(LAP)，通过酸裂解可被活化。在体内，酸性环境可存在于骨折附近和正在愈合的伤口。蛋白本身的裂解作用可使TGF-β复合体变为活化TGF-β。

TGF-β在细胞的生长、分化和免疫功能中发挥重要的调节作用。TGFβ可以抑制丝裂原、同种异体抗原刺激的T细胞增殖或IL-2依赖的T细胞生长，也可以抑制IFN-γ诱导黑素瘤细胞MHCⅡ类抗原表达，并且，TGFβ还可以抑制PBMC中IFN-γ和TNF-α的产生，并促进IL-6的表达。

TGFβ在肿瘤中以细胞背景依赖的方式发挥肿瘤抑制或肿瘤促进的而作用。TGF-β能够抑制原癌基因c-myc的表达，但在肿瘤发展过程中，随着突变的引入或表观遗传修饰的变化后，癌细胞逐渐耐受TGFβ信号的抑制作用，最终导致肿瘤的发展。

近年的研究发现，肿瘤微环境中TGFβ增加与免疫逃逸相关，TGFβ的增加会增加T细胞排斥，阻断TH1效应T细胞的浸润。Tauriello等人^[1]发现TGFβ阻断使小鼠肝转移癌症模型对PD1/PDL1疗法更敏感，而类似的Mariathasan等人^[2]报道了TGFβ阻断和PD-L1抗体联用，可以下调基质细胞的TGFβ信号通路，促进T细胞渗透进肿瘤中，激活强烈的抗肿瘤免疫反应。

虽然TGFβ抗体经过验证可以有效用于肿瘤治疗，但单独靶向TGFβ受体2的抗体疗法临床前试验效果一般，并且I期临床毒性很大。

参考文献：