[发明专利]一种用于沙门氏菌快速检测的关开型复合荧光纳米探针及其制备方法

权利要求书

1.一种用于沙门氏菌快速检测的关开型复合荧光纳米探针的制备方法，其步骤如下：

(1)免疫磁珠的制备

称取4～5g的FeCl₃·6H₂O和2～3g的Fe₃O₄·7H₂O溶解在150～300mL超纯水中，在通N₂的条件下搅拌至溶解；加入3～3.5g的NaOH，在80～90℃水浴条件下持续搅拌0.5～2.0h制得Fe₃O₄纳米磁珠；通过磁吸倾注法用乙醇和超纯水多次洗涤Fe₃O₄纳米磁珠至中性，再于50～70℃真空干燥得到裸磁珠；将0.3～0.8g裸磁珠与4～8mL正硅酸乙酯一同加入至200～300mL乙醇与水体积比为1：1的分散体系中，超声分散15～30min，50～70℃持续搅拌反应2～4h后用外磁场分离，再用超纯水充分清洗后得到硅烷化磁珠，即Fe₃O₄@SiO₂，于55～65℃真空下干燥；取0.1～0.5g的Fe₃O₄@SiO₂加入至15～25mL无水乙醇中，超声使其分散均匀，向其中加入1～5mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，用氨水调节pH至11，在55～65℃水浴中搅拌反应过夜，用超纯水多次洗涤除掉未偶联上的3-氨丙基三乙氧基硅烷，于55～65℃真空干燥得到化学修饰后的功能化磁珠，即Fe₃O₄@SiO₂@NH₂；

将30～60mg Fe₃O₄@SiO₂@NH₂用3～5mL、pH＝7.0的PBS缓冲液分散，超声20～40min；加入2～3mL、质量分数25％的戊二醛溶液，室温振荡反应2～4h后保存在pH＝5.0、0.2M的PBS缓冲液中，取0.8～1.3mL上述磁珠溶液加入5～8mL用PBS缓冲液按1：500体积比例稀释的沙门氏菌特异性抗体溶液，室温震荡反应1～3h得到免疫磁珠溶液；

(2)量子点的制备

取30～60mL、0.024mol/L的Na₂S溶液和30～60mL、0.032mol/L的ZnCl₂溶液，在快速搅拌并通氮气条件下逐滴交替滴加到30～60mL、0.05μmol/L的MPA-CdTe QDs溶液中，在55～65℃条件下密闭搅拌反应0.8～1.5h，得到MPA-CdTe@ZnS QDs溶液，静置后将该MPA-CdTe@ZnSQDs溶液与丙酮按1：1体积比例混匀，振荡3～8min，8000～15000r/min条件下离心3～8min，然后用超纯水离心洗涤沉淀，再用超纯水悬浮，得到纯化后的MPA-CdTe@ZnS QDs溶液，4℃保存；

(3)将免疫磁珠和量子点共同进行偶联反应，得到复合荧光纳米探针

取80～120μL步骤(2)中得到的量子点溶液中加入20～30μL、33.4mmol/L的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液和20～30μL、70.9mmol/L的N-羟基琥珀酰亚胺溶液，充分混匀并在20～30℃恒温振荡器上振荡反应10～20min，得到活化后的量子点溶液；取40～50μL步骤(1)制备的免疫磁珠溶液加入到活化后的量子点溶液中，恒温避光轻微振荡1.5～3.0h后磁分离，用PBS溶液重复洗涤2～4次制得复合荧光纳米探针；

(4)金纳米的制备，构建关开型复合荧光纳米探针

将400～700μL、0.213mol/L的半胱胺盐酸盐和40～60mL、1.4mmol/L的四氯金酸混合，在室温避光搅拌15～30min后，迅速加入10～15μL、10mmol/L新制备的硼氢化钠溶液，继续剧烈搅拌20～40min，制得酒红色溶液，用0.45μm的微孔滤膜过滤后，制得巯基乙胺修饰的金纳米溶液，即CS-AuNPs；用5～20μL、0.2mol/L的K₂CO₃将CS-AuNPs调节pH至8，取0.8～1.2mL、15倍比稀释、pH＝8的CS-AuNPs于离心管中，加入80～120μL步骤(3)制得的复合荧光纳米探针，混匀后静置反应10～20min，即得到被淬灭后的关开型复合荧光纳米探针。

2.一种用于沙门氏菌快速检测的关开型复合荧光纳米探针，其特征在于：是由权利要求1所述的方法制备得到。