[发明专利]枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的诱导培养基、方法及其应用

说明书

本发明公开了枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的诱导培养基、方法及其应用，属于应用微生物技术领域。所述培养基1000mL体系如下：酵母提取物5.0‑15.0g，KCl 20.0‑40.0mg，CaCl₂·2H₂O 0.2‑0.5g，MnCl₂·4H₂O 5.0‑15.0mg，MgSO₄·7H₂O 0.2‑0.5mg，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。本发明进一步公开了枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的制备方法及其应用。制备枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢操作简单，发酵时间短，高产量，高纯度，成本低，作用效果强。

技术领域

本发明属于应用微生物技术领域，具体地，涉及一种枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的诱导培养基、方法及其应用。

背景技术

枯草芽孢杆菌黑色变种（Bacillus subtilis var. niger）属于芽孢杆菌属（Bacillus sp.），营养细胞杆状，单个或呈短链状排列，细胞宽0.5~1.0μm，长2.0~4.0μm，革兰染色阳性，芽孢椭圆形，中生，不膨大，在胰胨大豆琼脂培养基上菌落表面光滑，不透明圆形，该菌株最显著的标志就是在含有机氮培养基上菌落呈褐色或棕红色。枯草芽孢杆菌黑色变种抗性强，无致病性，芽孢含水量低，芽孢壁分三层，厚而且致密，芽孢中的，批唆二经酸含量高以及含有耐热性酶，使得其在生物界成为抗逆性最强的生命体。

枯草芽孢杆菌黑色变种被广泛应用于科研、医疗、工业、农业和卫生等领域。国际上将该菌作为化学消毒剂、干热、环氧乙烷等杀菌效果的评价试验指标菌。我国卫生部也将该菌作为标准检测菌收入《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》（GB 15981-1995）及《消毒技术规范》中。

然而，在工业化生产中，枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢生成率低，制备周期长，难以满足灭菌生物指示剂制备所需芽孢数量。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明旨在提供一种快速制备枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的技术方案。为了完成该目的，本发明提供以下技术方案：

本发明第一方面提供一种诱导枯草芽孢杆菌黑色变种产生芽孢的诱导培养基，所述诱导培养基1000mL体系如下：酵母提取物5.0-15.0g，KCl 20.0-40.0mg，CaCl₂•2H₂O 0.2-0.5g，MnCl₂•4H₂O 5.0-15.0mg，MgSO₄•7H₂O 0.2-0.5mg，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。

在本发明的一些具体实施方案中，所述诱导培养基1000mL体系如下：酵母提取物12g，KCl 32mg，CaCl₂•2H₂O 0.25g，MnCl₂•4H₂O 10mg，MgSO₄•7H₂O 0.395mg，利用纯化水配置1000mL，调pH至7.2±0.2。

在发明的一些具体实施方案中，所述枯草芽孢杆菌黑色变种是指B. subtilis var. niger GDM1.370 ATCC 9372。

本发明第二方面提供一种枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢的制备方法，包括以下步骤：

（1） 菌种增殖：将枯草芽孢杆菌黑色变种菌株B. subtilis var. niger GDM1.370 ATCC 9372接入至增殖培养基中进行增殖培养；