[发明专利]化学发光酶联核酸适体同步检测VEGF与CEA的方法

说明书

本发明提供一种化学发光酶联核酸适体同步检测VEGF与CEA的方法，该方法制备了两种磁性酶标检测探针cDNA1‑MBs@Apt1‑HRP和cDNA2‑MBs@Apt2‑ALP，一方面探针上的两种核酸适体Apt1和Apt2可以实现对两种目标物的特异性识别，另一方面HRP和ALP两种标记物可以催化不同的化学发光底物，触发两种模式的化学发光。最终以时间分辨的方式分别在1.0 s和20 min两个时间窗口检测各目标物的化学发光信号，从而实现对VEGF和CEA的同步检测。用建立的方程对实际样品进行检测，其结果与试剂盒检测结果无统计学差异，表明该方法准确度较高。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体的说，涉及了一种化学发光酶联核酸适体同步检测VEGF与CEA的方法。

背景技术

癌症的发病率和死亡率高，治愈率极低，是医学研究上亟待解决的难题。通过对一些特异性肿瘤标志物的检测，可以实现癌症的早期诊断和治疗。癌胚抗原(CEA)是一种高糖基化抗原，分子量约为180KDa。正常细胞分泌的CEA会进入胃肠道，所以人血清中的CEA含量很低，但失去极性的癌细胞分泌的CEA会进入血液和淋巴液，因此在乳腺癌、结肠癌和肺癌等癌症患者血液、血清中均能发现CEA表达水平升高。此外CEA还是一种细胞粘附分子，其主要功能是执行癌细胞与基质胶原间或癌细胞间的粘附反应，在肿瘤的生长和转移过程中起重要作用。CEA的水平可用来预测手术成功率，也可以在化疗期间根据其检测水平评估治疗进展和结果。CEA是目前应用最广泛的肿瘤标志物和预后指标之一，尤其是对肺腺癌的诊断具有巨大的应用价值。

血管内皮生长因子(VEGF)又叫血管通透因子，是肝素结合同型二聚体蛋白，其分子量约为45KDa。它参与良性血管和肿瘤血管的再生，具有提升血管通透性、促进血管形成和血管内皮细胞迁移、增殖等作用，是胚胎发生和血管生理发育的关键调节因子。VEGF在许多人类疾病中起着重要的作用，如在肿瘤转移过程的开始，肿瘤细胞的快速生长需要独立的血液供应，以获得更多的氧气和营养，从而导致VEGF的过度表达。因此，高水平的VEGF可能是癌症的一个判断指标。从临床角度来看，VEGF已被用作各种人类疾病的血清标志物，包括癌症、增殖性视网膜病变、类风湿性关节炎、银屑病和帕金森病等。在哺乳动物中，VEGF家族一般由五个成员组成：VEGFA、B、C、D和胎盘生长因子。这些蛋白质中的每一种都含有在生物合成过程中被切割的信号序列，改变其相应的mRNA前体的异源剪接可产生多种亚型。VEGFA有4种不同的亚型，包括VEGF₁₂₁、VEGF₁₆₅、VEGF₁₈₉和VEGF₂₀₆。其中，VEGF₁₆₅作为主要的亚型，同时具有肝素结合区和受体结合区，对肿瘤的发展、转移以及其他疾病相关的病理性血管生成起着关键作用。VEGF₁₆₅已经被视为一种重要的肿瘤标志物，其表达量可用于监测肿瘤的的发生和发展，对临床诊断具有重要的应用价值。

尽管目前已经提出了许多检测CEA和VEGF的方法，但其中大多数方法只能检测一种组分的含量。多组分免疫能够实现多种样品的同步检测，具有成本低、样品消耗少、测定效率高等优点。利用多组分联合检测CEA与VEGF两种肿瘤标志物，可以提高肺癌早期诊断的准确率和可靠性，对提高患者生存率具有极其重要的意义。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，从而提供一种化学发光酶联核酸适体同步检测VEGF与CEA的方法。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：一种化学发光酶联核酸适体同步检测VEGF与CEA的方法，具体步骤包括：

提供一种VEGF检测探针和一种CEA检测探针；提供一种化学发光底液1和一种化学发光触发液；