[发明专利]一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学适配体传感器、其制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学适配体传感器、其制备方法及应用，具体包括以下几个步骤：①通过电沉积的方式在洁净的ITO表面共沉积一层AuPt纳米花结构，其中AuPt纳米花的尺寸约为80‑800 nm；②通过设计超亲水微井结构，起到富集目标物放大信号的作用；③适配体与检测目标物结合后，结构发生改变，从而导致电极表面电流的改变，通过DPV对电极表面电流变化进行检测，从而得到标志物的浓度。制备的电化学适配体传感器，可用于阿尔茨海默症标志物的检测；具有特异性强、灵敏度高、检测限低、相较于抗体检测更便宜的特点。

技术领域

本发明属于电化学生物传感技术领域，具体涉及一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学适配体传感器、其制备方法应用。

背景技术

阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease, AD）是一种老年痴呆症中最常见的一种形式，约占老年痴呆症的60%。临床症状主要为记忆功能减退、语言障碍、智力低下、思维迟钝等，严重时甚至会导致死亡。AD是一个非常复杂的神经退行性疾病，细胞外β-淀粉样肽（Aβ）的聚集形成淀粉样斑是AD的一个重要病理特征。研究发现，Aβ聚集形成寡聚体以及纤维与AD的病发有重要关系。不仅如此，Aβ寡聚体对神经细胞都有很强的毒性。因此，检测血液中Aβ寡聚体的含量对AD的早期诊断具有重要的意义。

检测血液中的Aβ寡聚体的含量对阿尔茨海默症的预防以及早期诊断有重要意义。目前对阿尔茨海默症标志物的检测方法有很多，如放射免疫分析法、电化学发光法、比色法等等，但多数检测方法繁琐、操作复杂、费用昂贵或检测限高，因此建立一种快速、简便、灵敏的检测方法有重要意义。

目前电化学适配体传感器已经广泛用于疾病标志物的检测，相较于免疫传感器而言，适配体具有与抗体相当的高特异性优势，同时比抗体更廉价、更容易获得。适配体传感器兼具了高灵敏度、高特异性、检测速度快等优点，在临床检测、环境检测、食品安全控制以及生物分析等领域都有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测阿尔茨海默症标志物的电化学适配体传感器、其制备方法及应用。

基于上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种金、铂共沉积的AuPt纳米花结构，通过下述步骤制得：

用电沉积的方法在制备AuPt纳米花结构：分别配制等浓度的氯金酸和氯铂酸的硫酸溶液，等体积混合后，用三电极体系，导电玻璃（ITO）作为工作电极，Ag/AgCl作为参比电极，铂片电极作为辅助电极，用-0.6V到-0.1V的电压，沉积300s~1200s，即可在导电玻璃表面长出金铂纳米花结构。进一步地，所述氯金酸或氯铂酸的硫酸溶液配制过程如下：将氯金酸或氯铂酸溶于0.5M的硫酸中配制成1mg/mL~10mg/mL的溶液。所述AuPt纳米花结构的整体尺寸大小为80-800 nm；且纳米花表面金铂均匀分布。

一种利用上述AuPt纳米花结构制备检测阿尔茨海默症标志物的电化学适配体传感器的方法，制备步骤如下：

（1）ITO的清洗：将ITO玻璃切割成1cm×2cm大小，然后依次用丙酮、乙醇、超纯水超声清洗10min，最后用氮气吹干备用；

（2）将沉积有氯金酸和氯铂酸的导电玻璃，用超纯水冲洗后，晾干；

（3）将步骤（2）所得的ITO电极浸泡在正十二烷基硫醇里20~30小时；

（4）然后用光掩膜板，覆盖步骤（3）处理后的ITO电极，然后用O₂ plasma处理（100W，60s），得到超亲水微井；

（5）在步骤（4）得到的ITO电极表面的超亲水微井里滴加带巯基的Aβ寡聚体适配体，37℃反应1h，然后用磷酸缓冲液冲洗后，晾干；

（6）滴加巯基己醇（MCH）溶液封闭，孕育1h，然后用磷酸缓冲液冲洗电极表面，晾干；