[发明专利]用于同时检测七项呼吸道病原体核酸的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了用于同时检测七项呼吸道病原体核酸的试剂盒及其应用。该试剂盒是基于双扩增（RNA恒温扩增+多生物素信号放大）技术，涉及甲型流感病毒的H1N1/H3N2型、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒的1/2/3型、腺病毒的B/E属、肺炎支原体、肺炎衣原体。本发明无需RNA提取，在检测中不易污染，灵敏度高、特异性强，可广泛用于这七项呼吸道病原体核酸检测。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种基于双扩增(RNA恒温扩增+多生物素信号放大)技术联合检测七项呼吸道病原体核酸的试剂盒及其应用。

背景技术

流感病毒(FLU)是一种有包膜、分节段基因组的单链RNA病毒，属于正粘病毒科。根据核蛋白和包膜内侧面的M1蛋白的抗原性将流感病毒分甲、乙、丙三型。甲型流感病毒再根据包膜表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)两种刺突的抗原性分若干亚型，目前包括H1～H16亚型和N1～N9亚型，甲型流感病毒的亚型是把HA和NA列在一起命名的。H1N1、H3N2为较常见的季节性流感病毒。甲型流感病毒(FluA)每10年到30年会大爆发一次，而且每年都会发生甲型或乙型流感病毒(FluB)流行病。流感病毒的感染是季节性的，特别在北半球是从11月到4月容易爆发。小孩和老年人以及长期患有心血管肺炎的病人易于被感染。通过吸入空气中飞沫或者传染物仅经过1～3天潜伏期就会散播出去。

呼吸道合胞病毒(RSV)是单链RNA包膜病毒，广泛分布于世界各地，是引起婴幼儿下呼吸道感染主要的和常见的病原体，在绝大部分地区RSV所致的1岁以内婴幼儿肺炎和支气管炎远远高于其他病原微生物。成年人感染会导致普通感冒。RSV通常是季节性的，易于在冬天和早春感染并引起多达5个月的流行期。我国每年数千万住院的婴幼儿因RSV感染的占50％，且RSV的再感染率很高，成人RSV的再感染同样很常见。该病毒具有传染性强，症状与副流感病毒肺炎、轻症流感病毒肺炎及轻症腺病毒肺炎在临床上几乎无法区别，因此，实验室诊断就显得非常重要。

副流感病毒(PIV)是单链RNA包膜病毒，四种亚型各有不同的临床和流行病学特征。1型和2型的最典型的临床特征是造成儿童喉气管支气管炎，1型是儿童喉气管支气管炎的主要原因，而2型次之。1型和2型均能造成其它的上呼吸道和下呼吸道疾病。3型经常导致肺炎和细支气管炎。副流感病毒是常常引起儿童下呼吸道感染的一种病毒，其致病性仅次于呼吸道合胞病毒(RSV)。人类副流感病毒的潜伏期一般在1～7天左右。

腺病毒(AdV)是一种双链DNA病毒。腺病毒感染呼吸道的典型症状是咳嗽、鼻塞和咽炎，同时伴有发热、寒战、头痛和肌肉痛等，一般潜伏期5～7天左右，容易侵犯6个月至5岁小孩，占儿童呼吸道感染5％～20％。一般秋春以呼吸道感染为多，春、初夏以合并结膜炎为多。大部份由飞沫传染，少部份由粪便接触感染。疾病的过程约5～7天，也有进入第二星期的。感染2～3星期后产生抗体，可持续一至数年，同型病毒再感染的机率很少。腺病毒引起的呼吸道、泌尿道以及胃肠道感染在临床表现方面与其他病原微生物的感染非常相似，因此，仅根据临床表现来进行疾病的诊断是比较困难的，需要进行实验室诊断加以证实。

肺炎支原体(MP)是造成人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。肺炎支原体是介于细菌与病毒之间的一种胸膜肺炎微生物，为已知独立生活的生物中的最小者，能耐冰冻。MP是儿童和成人社区获得性肺炎的常见病原体。

肺炎衣原体(Cpn)是一种专性细胞内寄生菌，是人类呼吸道疾病的重要病原体，可引起急慢性呼吸道疾病，社区获得性肺炎、支气管炎和鼻窦炎5～10％是由肺炎衣原体引起。肺炎衣原体的感染具有散发和流行交替出现的周期性，散发通常持续3～4年，有2～3年的流行期，在流行期间可有数月的短暂爆发发生。病人之间传播间隔期平均为30天，在密集人群中流行可持续6个月。肺炎衣原体引起的吸道感染临床表现不典型，通常以咽痛和音哑起病，数日至7天后出现咳嗽，与其他呼吸道疾病相比，自起病至就医的时间以肺炎衣原体感染为最长。