[发明专利]动物细胞灌流培养的方法有效
| 申请号： | 201911312999.2 | 申请日： | 2019-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN110964688B | 公开（公告）日： | 2022-01-21 |
| 发明（设计）人： | 罗颖娣;薛圣杰;郑军洁;黄光诚;杨晓明 | 申请（专利权）人： | 杭州奕安济世生物药业有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/07 | 分类号： | C12N5/07 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 王焕 |
| 地址： | 310000 浙江省杭州市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 动物 细胞 灌流 培养 方法 | ||
1.动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：
动物细胞接种于生物反应器中进行批培养至第2～3天，进行灌流培养至第30～35天；所述批培养的基础培养基为ActiPro培养基；
所述灌流培养的培养基中，起始谷氨酰胺的浓度为2～4mM，起始总葡萄糖的浓度为6～10g/L；
所述灌流培养过程中，当所述灌流培养的体系中，谷氨酰胺的浓度低于0.5～2.5mM和/或总葡萄糖的浓度低于1.0～4.5g/L时，调整所述灌流速率至1.2～2.0RV/day；当调整所述灌流速率至1.2～2.0RV/day后，所述灌流培养的体系中，谷氨酰胺的浓度低于0.5～2.5mM和/或总葡萄糖的浓度低于1.0～4.5g/L时，调整所述灌流培养的培养基中，谷氨酰胺的浓度为6～8mM，总葡萄糖的浓度为16～25g/L；
所述灌流培养的第6～8天开始时，调节灌流培养的培养基中总葡萄糖含量为16～20g/L；所述灌流培养的第15～17天开始时，调节灌流培养的培养基中总葡萄糖含量为10～16g/L；
所述灌流培养从开始至第15～20天时，补料培养基为含5％体积分数Cell Boost 7a和0.5％体积分数Cell Boost 7b的ActiPro培养基；所述灌流速率为0.5～1.2RV/day；所述灌流培养的第15～20天开始时，调整所述灌流速率为1.2～2.0RV/day；
当调整所述灌流速率至1.2～2.0RV/day后，所述灌流培养的体系中，谷氨酰胺的浓度低于0.5～2.5mM和/或总葡萄糖的浓度低于1.0～4.5g/L时，补料培养基为含5％体积分数Cell Boost 7a和1.5％体积分数Cell Boost 7b的ActiPro培养基；
所述灌流培养的第6～8天开始时，开启放流；所述放流的速率为0.15～0.20RV/day；
所述接种的密度为(0.5～1.0)×106cells/mL。
2.根据权利要求1所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，通过调控放流速率来调控细胞密度，使细胞密度控制在目标密度范围内。
3.根据权利要求1所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，所述动物细胞由以下各者所构成的群组中选出：
CHO、CHO K1、DXB-11、DG-44、CHO-S、HEK293、BHK细胞系。
4.根据权利要求1所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，所述灌流培养从开始至第15～20天时，所述灌流速率为0.8～1.0RV/day。
5.根据权利要求4所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，所述灌流培养的第15～20天开始时，调整所述灌流速率为1.5～2.0RV/day。
6.根据权利要求1所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，所述灌流培养第25～28天开始时，补料培养基为含5％体积分数Cell Boost 7a和1.5％体积分数Cell Boost 7b的ActiPro培养基。
7.根据权利要求1所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，所述接种的密度为0.5×106cells/mL。
8.根据权利要求1所述的动物细胞灌流培养的方法，其特征在于，所述灌流培养采用交替式切向流培养方式。
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