[发明专利]可特异性结合CKMB的结合蛋白、其应用以及检测CKMB的方法

说明书

本发明公开了一种可特异性结合CKMB的结合蛋白、其应用以及检测CKMB的方法，涉及抗体技术领域。本发明公开的结合蛋白包含抗原结合结构域，抗原结合结构域包括至少一个互补决定区。该结合蛋白可以特异性结合CKMB，并具有较好的结合活性和亲和力，其可以用于检测CKMB以及用于诊断与CKMB相关的疾病。

技术领域

本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及可特异性结合CKMB的结合蛋白、其应用以及检测CKMB的方法。

背景技术

肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes，CK)有四种同工酶形式：肌肉型(MM)、脑型(BB)、杂化型(MB)和线粒体型(MiMi)。MM型主要存在于各种肌肉细胞中，是由两个相同的亚基组成的二聚体，BB型主要存在于脑细胞中，MB型主要存在于心肌细胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。CKMB(即杂化型肌酸激酶同工酶)通常分为MB 1与MB2两个异型，在心肌细胞中，CKMB主要以MB 2的形式存在，一旦心肌细胞发生损伤就会释放MB 2，使血清中的CKMB水平在短时间内迅速升高，其升高时间通常于发病6h内，且在24h左右达到峰值，并于72h后逐渐降低，直至恢复正常水平，这表明CKMB可于早期反映出心肌受损情况。由于CKMB在诊断急性心肌梗死中的敏感性和特异性比较高，经过多年的深入研究和临床分析，血清中CKMB升高已成为公认的诊断急性心肌梗死(AMI)和确认有无心肌坏死的重要指标，具有较高的诊断准确率，临床上诊断心肌损害标准就是在排除服用对心肌有损害药物及其他引起心肌酶、心电图异常疾病的基础上，出现含CKMB在内至少一项心肌酶增高合并心电图可能表现异常。特别是各级医院中对于AMI患者的溶栓治疗以及急诊经皮冠状动脉介入治疗的使用越来越广泛，这就要求必须要对AMI进行早期诊断。

由于AMI发病急，进展迅速，病人就诊后需要尽快进行对症治疗。临床应用较多的检测方法是大型生化仪，其检测结果准确，且可以覆盖多个检测指标。但是由于其耗时长，仪器每天需要校准和室内质控，不适合AMI急诊检测需要。琼脂糖凝胶电泳在分离CKMB时，主要根据CK各同工酶不同的分子量及电荷，主要通过扫描各酶谱，获取各区带所占的百分比，并与总酶CK的活力相结合，获取各同工酶的酶活力，但该方法与免疫抑制法相比操作较为复杂，耗时较长且无法达到CKMB质量的定量检测。基于免疫层析的胶体金颗粒检测方法具有使用简便、快速的特点，在传染病以及自身抗原检测方面有较多应用。但是，由于灵敏度不高、不能准确定量，限制了其在AMI检测方面的应用。

目前在临床实验室多采用免疫抑制法测定CKMB，该方法简单迅速，但特异性差。其检测原理是通过抗CK-M抗体，使M亚基活性受到抑制，对B亚基的活性进行检测，因为CKBB在健康人体中的含量极少，可直接忽略，将所测结果乘以2，即可获得血液中CKMB的活性。该方法具有操作简单、检测速度快、成本低等优势，在临床实验室检验中被广泛应用。但后来发现，肌肉分解和一些非心脏疾病均可导致B亚基含量升高从而带来CKMB的假阳性增加。

酶质量法采用化学免疫发光技术进行定量检测，以双抗体夹心法为主，使抗人CKMB抗体包被于磁微粒等固相载体，其标记物为酶标抗人CKMB抗体，对CKMB进行定量分析检测。该检测方法对抗原抗体反应具有较高的特异性，与CKBB及CKMM无交叉反应，具有更高的灵敏度，不受血清中巨CK及其他酶类等因素的影响。因此，酶质量法在准确性上有更明显的优势。但酶质量法所用的抗人CKMB抗体也多为杂交瘤技术生产的鼠源单克隆抗体，其受小鼠个体影响特别大，生产不稳定、批间差异大，小鼠自身抗体纯化难度大。因此，现有的抗CKMB抗体由于活性低、亲和力差，无法很好地应用于CKMB的检测中。因此，本领域对于有效且特异性结合CKMB并可对其进行检测的抗体存在着强烈需求。

发明内容

本发明的目的在于提供可特异性结合CKMB的结合蛋白、其应用以及检测CKMB的方法。本发明提供的结合蛋白可以特异性结合CKMB，并具有较好的结合活性和亲和力，其可以用于检测CKMB以及用于诊断与CKMB相关的疾病，本发明为CKMB的有效检测和与CKMB相关的疾病的诊断提供了更多选择。

名词定义