[发明专利]一种生物靶向抗菌的DspB固定酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种生物靶向抗菌DspB固定酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)磁性纳米材料的制备：将铁盐与亚铁盐反应，得到具有超顺磁性的Fe₃O₄纳米粒子后，再加入正硅酸四乙酯反应，生成具有核壳结构的磁性纳米材料A；

2)磁性纳米材料的修饰：对所述磁性纳米材料A进行末端醛基修饰，或末端聚多巴胺修饰，或末端羧基修饰，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B；

3)糖苷水解酶的固定：将所述磁性纳米材料B重悬于用磷酸缓冲盐溶液稀释的糖苷水解酶酶液中，进行迈克尔加成反应，得到生物靶向抗菌DspB固定酶；

所述步骤2)中对所述磁性纳米材料A进行末端醛基修饰，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B，包括：

向所述磁性纳米材料A中加入硅烷偶联剂，在80℃下回流冷凝4-8h，进行氨基化修饰反应，待所述氨基化修饰反应结束后，加入戊二醛，于40℃下搅拌10-24h，进行醛基修饰反应，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B；

所述步骤2)中对所述磁性纳米材料A进行末端聚多巴胺修饰，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B，包括：

在pH为8.5的Tris-HCl缓冲液中，将所述磁性纳米材料A与多巴胺混合后，于25℃水浴下搅拌10-18h，进行聚多巴胺修饰反应，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B；

所述步骤2)中对所述磁性纳米材料A进行末端羧基修饰，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B，包括：

向所述磁性纳米材料A中加入硅烷偶联剂，在80℃下回流冷凝4-8h，进行氨基化修饰反应，待所述氨基化修饰反应结束后，加入二甲基亚砜和丁二酸酐，于25℃下搅拌18-24h，进行羧基修饰反应，得到固定糖苷水解酶的磁性纳米材料B。

2.根据权利要求1所述的生物靶向抗菌DspB固定酶的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中所述铁盐与所述亚铁盐的摩尔比为(1.5～2.5)∶1。

3.根据权利要求1所述的生物靶向抗菌DspB固定酶的制备方法，其特征在于，所述硅烷偶联剂为N-β-(氨乙基)-γ-氨丙基三甲氧基硅烷，或为γ-氨丙基三乙氧基硅烷。

4.根据权利要求1所述的生物靶向抗菌DspB固定酶的制备方法，其特征在于，所述步骤3)中所述迈克尔加成反应的反应温度为25℃，反应时间为1-8h。

5.一种生物靶向抗菌DspB固定酶，其特征在于，由权利要求1至4任一项所述的生物靶向抗菌DspB固定酶的制备方法制得。

6.权利要求5所述的生物靶向抗菌DspB固定酶在生物抗菌中的应用，其特征在于，包括以下步骤：

将生物靶向抗菌DspB固定酶加入至已接种菌液，且过夜培养的96孔聚苯乙烯微量滴定板中，其中，生物靶向抗菌DspB固定酶和96孔聚苯乙烯微量滴定板中菌液体积比为0.01～0.5U∶200μL，两者混合后，进行生物被膜水解反应。

7.根据权利要求6所述的生物靶向抗菌DspB固定酶在生物抗菌中的应用，其特征在于，所述生物被膜水解反应的反应温度为37℃，反应时间为10-60min。