[发明专利]用于九价HPV病毒分型检测的复合扩增体系及其试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于九价HPV病毒分型检测的复合扩增体系及其试剂盒，所述的扩增体系中包括19对检测引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑38所示。采用本发明中的扩增系统和方法可检出9种HPV分型，所选分型为9价疫苗对应分型，可度高并有较实用检出意义。每种可检出分型都有两种检测位点分别设定在HPV基因组的L1区和E区，可保证试剂盒检测HPV分型更高效、精准、灵敏。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种用于九价HPV病毒分型检测的复合扩增体系及其试剂盒。

背景技术

人类乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus，简称HPV)是一种乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒感染引起的一种性传播疾病，主要感染区域有人类表皮和粘膜鳞状上皮，已知HPV可引起人类良性的肿瘤和疣。该病毒特异性很高，至今已分离出130多种，主要类型为HPV1、2、6、11、16、18、31、33及35型等，其中HPV16和18型长期感染可能与女性宫颈癌有关。从HPV感染到宫颈癌发生需要较长时间，因此尽早检测是否感染HPV，有利于预防宫颈癌的发生。最新的宫颈癌筛查指南也建议高危HPV分型检测方法作为一线的宫颈癌筛查方法。

目前临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹和PCR等，其中以PCR方法的敏感性最高，是目前应用最多的方法。基于PCR技术的检测方法又包含特异引物PCR和通用引物PCR之后的膜杂交法、基因芯片法、反向点杂交法、流氏荧光杂交法、荧光探针法等。不同的方法有各自的优点和不足，无法兼顾操作简便、灵敏度高、特异性好、价格低廉和客观性强的特点，只能根据不同需求选择合适、有效的检测方法满足检测要求。

HPV病毒基因组较小，仅含有约7900个碱基对。病毒基因组分为3个部分：早期基因区(E)、晚期基因区(L)及将早期区与晚期区分开的长调控区(LCR)。调控区主要调控病毒的转录，控制病毒蛋白和感染颗粒的产生。早期区编码E6、E7、E1、E2、E4、E3和E5蛋白质，主要参与病毒DNA复制、转录。晚期区编码L1、L2蛋白分别是病毒的主要壳蛋白和次要壳蛋白。根据不同基因区功能性特点和序列保守性特征，目前基于荧光标记PCR方法检测人乳头瘤病毒DNA大多选择的靶点为E6E7区或者L1区。其中L1区序列非常保守，是区分不同亚型的主要依据，但是在HPV病毒DNA整合进入人基因组的过程会有一定几率导致HPV L1基因缺失。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种操作简单、灵敏度高、特异性好且价格较低的用于九价HPV病毒分型检测的复合扩增体系及试剂盒。

实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：

本发明中的用于九价HPV病毒分型检测的复合扩增体系，是在基于所选取的9种HPV分型病毒的基础上所设计的19对检测引物，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1-38所示。

具体的，所述引物包括对应于9种HPV分型病毒中的L区和E区检测位点中的18对检测引物，和一对针对人类基因组DNA的β-globin的检测引物。

进一步，在扩增体系中包括0.1-0.4μM多对所述检测引物。

进一步，还包括两种不同的荧光标记，同一荧光标记对应于所有HPV分型病毒相同的L区或E区的检测位点。即所有HPV分型病毒相同的L区的检测位点所使用的荧光标记相同，所有HPV分型病毒相同的E区的检测位点所使用的荧光标记相同，且L区的检测位点和E区的检测位点的荧光标记又不相同

进一步，具体的采用FAM标记L区检测位点，采用HEX标记E区检测位点。

进一步，所述HEX标记还用于标记对应于人类基因组DNA的β-globin检测位点。