[发明专利]一种外周血中的肺小细胞肿瘤细胞数量的检测方法

说明书

本发明为肺小细胞检测提供一个可靠的内控质量控制方法，在精确的知道检测技术上限的同时准确的计算出细胞的回收率而得出整体循环肿瘤细胞的数目，极大的提升检测的可信度。本发明所述的方法，包括以下步骤：1)外周血样本的获得，2)向外周血样本注入200颗人工合成的仿细胞荧光圆珠，3)采用以下技术对外周血小细胞进行富集，4)在显微镜下辨认及计数富集后外周血中余下的仿细胞荧光圆珠，根据圆珠回收率计算公式计算外周血中肺小细胞的数目。

技术领域：

本发明涉及一种外周血中的肺小细胞肿瘤细胞数量的检测方法。

背景技术：

小细胞肺癌(SCLC)在肺癌中所占的比例约百分之二十到百分之二十五。小细胞肺癌是肺癌中恶性程度最高的，预后最差，因此日常如果发现该病的症状时，需及早诊断，及时治疗；早诊断的方法包括，检测外周血中的肺小细胞肿瘤细胞数量。

现有技术公开了外周血中的肺小细胞肿瘤细胞富集方法，如：

C.Wu,H.Hao,L.Li,X.Zhou,Z.Guo,L.Zhang,X.Zhang,W.Zhong,H.Guo,R.Bremner,and P.Lin(2009)Preliminary investigation of the clinical significance ofdetecting circulating tumor cells enriched from lung cancer patients.J.ThoracOncol 4:30-6文献，公开了以下内容：肺癌临床检测及富集循环细胞。

Q.Chen,F.Ge,W.Cui,F.Wang,Z.Yang,Y.Guo,L.Li,R.Bremner,and P.Lin(2013)Lung Cancer Circulating Tumor Cells Isolated by the EpCAM-IndependentEnrichment Strategy Correlate with Cytokeratin 19-Derived CYFRA21-1 andPathological Staging.Clin Chim Acta 419:57-61文献，公开了以下内容：非EpCAM依赖性富集肺癌循环肿瘤细胞。

Application Value and Evaluation of Circulating Tumor Cells(CTC)Inspection of Small Cell Lung Cancer Patients GE Han-tian；WANG et al Chinaand Foreign Medical Treatment 2017-22文献，公开了以下内容：循环肿瘤细胞在肺小细胞病患的应用与评估。

但现有技术的缺陷在于，没法知道捕获到的细胞占整体肺小细胞总数的比例和准确数目，无法定量。

我们知道，肺小细胞的数目相对其它肿瘤类高非常多，因此需要提供定量数据，并制定一种捕获到的细胞占整体肺小细胞总数的比例的标准，根据该标准，判断小细胞肺癌的发生，发展，治疗效果等，可用于小细胞肺癌的检测，排除假阳性，判断药物的治疗效果。

发明目的：

本发明为肺小细胞检测提供一个可靠的内控质量控制方法，在精确的知道检测技术上限的同时准确的计算出细胞的回收率而得出整体循环肿瘤细胞的数目，极大的提升检测的可信度。

本发明的检测方法，步骤如下：

1)外周血样本的获得

采集6ml人的外周血于任何一种含抗凝剂(如EDTA、肝素、或ACD等)的采血管中(BD，New Jersey，USA)。

2)向外周血样本注入200颗人工合成的仿细胞荧光圆珠

3)采用以下技术对外周血小细胞进行富集