[发明专利]一种促进植株形成外生菌根的方法

说明书

本发明涉及生物领域，具体涉及一种促进植株形成外生菌根的方法，包括以下步骤：(1)制备菌液：将菌株打碎后浸泡于可分解宿主植物根际细胞细胞壁的酶液中，得到菌液；(2)侵染宿主：将宿主植物根际于菌液中浸泡后进行种植，所述菌株与宿主之间为外生菌根共生关系。本发明可显著提高菌株侵染宿主后形成的外生菌根的数量。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种促进植株形成外生菌根的方法。

背景技术

近年来由于大量采集，加上生长环境恶化，许多大型真菌的数量日益减少，人们掠夺式的采收使子实体不能保留到放射孢子的阶段，其正常生活史被切断，致使产量下降趋势日愈明显。现在，采用人工分离、纯化及筛选优良菌株，将人工培养的菌丝体侵染到宿主，使菌丝体与宿主形成外生菌根，最终长成子实体。此方法的前半部分是人工操作，后半部分是在自然条件下完成的，即为半人工栽培。而提高菌丝体侵染到宿主的侵染率对于实现菌种的人工培育有着重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进植株形成外生菌根的方法，以解决现有的诸多菌种人工培育率繁育率低的问题。

为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种促进植株形成外生菌根的方法，包括以下步骤：

(1)制备菌液：将菌株打碎后浸泡于可分解宿主植物根际细胞细胞壁的酶液中，得到菌液；

(2)侵染宿主：将宿主植物根际于菌液中浸泡后进行种植，所述菌株与宿主之间为外生菌根共生关系。

外生菌根(Ectomycorrhiza)是指菌根真菌菌丝体侵染宿主植物的根皮层细胞间形成菌丝网(称为哈蒂氏网)，同时在根表蔓延形成菌丝套，替代根毛的作用，吸收养料和水分。在真菌菌丝体分泌的纤维素酶、果胶酶等水解酶的酶促作用下，通过侵染点进入到皮层细胞间隙；分布于根表皮外表面的菌丝体则会形成菌套将根尖包裹，从而完成侵染过程。菌根真菌从植物体内获取生长必需的营养物质，而植物通过与共生真菌结合，也能更好的从土壤中得到所需的养分及水分等。外生菌根的特征是真菌菌丝不伸入根部细胞，只蔓延于根的外皮层细胞间。植物外皮层细胞朝向外边的细胞壁通常肥厚，或细胞壁外面有由纤维素和角质组成的层，还有在此层外面覆盖一层角质层的。植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，纤维素是形成细胞壁的框架。在一些成熟和加厚的细胞壁中，则常会沉积木质素。所以，在菌种侵染宿主的过程中，成功破除宿主根际外皮层细胞的细胞壁是至关重要的第一步。

作为优选，所述的酶液包含纤维素酶和/或漆酶。

作为优选，所述的制备菌液步骤中，浸泡温度为2～6℃，浸泡时间为6～12小时，一方面使菌株包覆、吸附适量的酶，另一方面利用酶去除其他杂质物质。

作为优选，所述的制备菌液步骤中，浸泡温度为4℃，浸泡时间为10小时。

作为优选，所述的侵染宿主步骤中，种植后，每10～20天向宿主补充原配比的酶液10～40ml。种植后，宿主根际外皮层会生长出新的细胞，间隔一定时间采用酶液进行破坏，进一步利于菌株的侵染。酶液用量不可过多，过多会导致宿主遭破坏程度过重而死亡，过少不利于菌套的形成。

作为优选，所述的酶液包含纤维素酶，所述纤维素酶的浓度为300U/ml。

作为优选，所述的酶液包含漆酶，所述漆酶的浓度为20U/L。

作为优选，酶液包含纤维素酶和漆酶，所述纤维素酶的浓度为150～300U/ml，所述的漆酶浓度为20～200U/L。

酶液的浓度对于宿主外皮层细胞的破坏程度有重要影响，避免破坏程度不足或者破坏程度过深损害宿主内部细胞。

作为优选，所述的菌株为干巴菌菌株，所述的宿主为松苗。