[发明专利]促吞噬肽修饰阿魏酸生物可降解纳米囊泡的制备方法

说明书

本发明涉及一种促吞噬肽修饰阿魏酸生物可降解纳米囊泡的制备方法，包括缩合反应及制备成品等两个步骤。本发明制备工艺简单、生产制备效率高，且首次通过马来酰胺反应制备促吞噬肽修饰阿魏酸聚乙二醇‑聚乳酸‑羟基乙酸生物可降解纳米囊泡，并体外进行抗猪细小病毒药效学评价，建立了促吞噬肽修饰阿魏酸聚乙二醇‑聚乳酸‑羟基乙酸生物可降解纳米囊泡的制备方法，发现促吞噬肽修饰阿魏酸聚乙二醇‑聚乳酸‑羟基乙酸生物可降解纳米囊泡能显著提高抗病毒及免疫增强功能，提高其生物利用度。

技术领域

本发明涉及一种促吞噬肽修饰阿魏酸聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸生物可降解纳米囊泡制备方法，属药品领域技术领域。

背景技术

抗病毒药物研发目前是中兽医学及其农业领域的一大难题，亟需开发出耐药性小，抗病毒效果显著的新型抗病毒药物。天然产物因其独特的化学结构，毒副作用小，抗病毒效果优获得了大多数专家学者的关注。市场现有抗病毒药物多来自于天然产物并且具备一定的抗病毒效果，由于大多数抗病毒药物具有耐药性且疏水性强，致使来源于天然产物中的抗病毒药物极易耐药且临床应用存在生物利用度低且毒副作用大等缺陷，因此，提高抗病毒药物的生物利用度成为亟待解决的问题。近年来，纳米给药系统成为解决生物利用度的首选方法，相比现有的方法具有以下几种优势：1）纳米给药系统低毒性且生物利用度高；2）纳米给药系统粒径大小均匀，性质稳定；3）纳米给药系统载药量合适，生物活性增强；3）制备工艺简单方便，成本低；4）纳米药物具备一定的靶向定位，体内分布良好，纳米粒释放稳定。

阿魏酸（Ferulic Acid，简称 FA）是一种酚酸物质广泛存在于天然植物中，尤其在麦麸、米糠等谷物类食品原料中含量较多，在蜂胶、川芎、阿魏、当归、酸枣仁及升麻等中药材中也有较高的含量。其具有抗菌、抗氧化、抗炎、抗辐射、免疫调节、抗突变及防癌等药理特性，已经成为研究者研究热点。因其在谷物类食品原料中含量较多，易合成且收率高，相对于动物而言，具有良好的临床应用前景。前期研究发现，阿魏酸通过清除自由基（ROS）活性进而抑制猪细小病毒诱发PK-15细胞凋亡，但是阿魏酸临床应用因为药物不溶性且代谢吸收快，作用时间短，作用范围不集中，临床用量大以及由此带来的副作用增强等一定局限。因此，如何开发天然产物阿魏酸，提高其生物活性及生物利用率，是其在临床应用亟待解决的问题。

病毒感染后，机体内源性免疫应答活化是机体自我修复和保护性的重要生理功能。脾源性因子促吞噬肽（Tuftsin）为重要的免疫活性因子，增强巨噬细胞、中性粒细胞吞噬、趋化作用，促使机体Th1/Th2漂移，进而增强机体的免疫应答，进一步发挥抗病毒、抗菌、抗肿瘤的作用。单一的Tuftsin肽链较短，体液免疫过程中易降解，并且免疫原性较差，对临床评价及应用具有一定局限性。前期研究发现Tuftsin系列衍生物以及与其他药物联用等有广阔的应用前景。

因此针对这一现状，迫切需要一种全新的生物可降解纳米囊泡制备方法，以满足实际使用的需要。

发明内容

本发明目的就在于克服上述不足，提供一种促吞噬肽修饰阿魏酸聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸生物可降解纳米囊泡制备方法，以以解决现有技术存在的生物利用率不高、效果不佳等问题。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现：

一种促吞噬肽修饰阿魏酸生物可降解纳米囊泡的制备方法，包括以下步骤：

S1，缩合反应，将PLGA-COOH与NH2-PEG-COOH通过酸胺缩合反应连接生成PLGA-PEG-COOH，将促吞噬肽加入PLGA-PEG-COOH连接生成PLGA-PEG-Tf；

S2，制备成品，将阿魏酸，PLGA-PEG-Tf和氯仿混合搅拌，得到油相；将油相以0.01—0.1米/秒的速度匀速加入低浓度PVA溶液低温超声，然后将所获得的溶液以0.01—0.1米/秒的速度匀速加入高浓度PVA溶液中搅拌均匀，得稳定的水包油型复乳；水包油复乳经减压蒸发和低温高速离心收集沉淀，即得促吞噬肽修饰阿魏酸聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸纳米囊泡。