[发明专利]用于检测视神经脊髓炎的miRNA标志物及其应用

说明书

本发明公开了用于检测视神经脊髓炎的miRNA标志物及其应用。本发明开发了对视神经脊髓炎谱系疾病具有临床诊断潜能及预测预后能力的血清外泌体miRNA标志物hsa‑miR‑122‑3p和hsa‑miR‑200a‑5p，证实了这两个miRNA作为诊断视神经脊髓炎和预测严重程度的无创标志物具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术及神经病学领域，涉及用于检测视神经脊髓炎的miRNA标志物及其应用。

背景技术

视神经脊髓炎光谱疾病(NMOSD)和多发性硬化症(MS)是中枢神经系统的炎症性脱髓鞘疾病，具有高复发、高致残的特点。NMOSD以前被认为是MS的亚型，二者具有相似的临床表现，例如视神经炎和急性脊髓炎。全球范围内，NMOSD的患病率较为接近，约(1～5)/(10万人·每年)，但在非白种人群(如亚洲人群)中更为易感。NMOSD和MS具有不同的发病率，且中西方比例差异明显。NMOSD：MS比例上，白种人约为1:100，非白种人约为40:60。二者临床表现具有很大的相似性，极易诊断错误。直到发现了针对水通道蛋白4的免疫球蛋白G抗体(AQP4-IgG)，才将二者归为独立的疾病。AQP4-IgG被认为是NMOSD高度特异性的生物标志物，并且在80％以上的NMOSD患者血清学检测为阳性。水通道蛋白4表达在整个CNS，主要在星形胶质细胞的终末期过程中表达。AQP4-IgG靶向aquaporin-4，在初始阶段诱导星形胶质细胞损伤，在后期则诱导髓鞘损伤和轴突丢失。MS的发病机制很复杂，T和B细胞对髓磷脂抗原的自身反应起重要作用。尽管AQP4-IgG测试和磁共振成像可以帮助诊断NMOSD和MS，但仍需要探索其他可靠的生物标志物。

MicroRNA(miRNA)是一类短的非编码RNA，长度约为18至25个核苷酸。MiRNA通过抑制其靶向mRNA的表达来完成重要的生物学功能，在临床实践中证实miRNA可以成为新型的疾病诊断和预后生物标志物。最近使用下一代测序技术(NGS)进行的研究表明，NMOSD中循环的miRNA可能允许其与MS区分。在最近的几十年中证实外泌体具有选择性的细胞与细胞间通信，参与重要的生物学调控。外泌体是直径为30-120nm的纳米囊泡，形成于细胞质中，几乎所有细胞都可以分泌。外泌体根据来源的细胞而异，在血清和其他体液体中相对容易检测到。研究已经表明，外泌体可以穿透血脑屏障，并参与中枢神经系统的多种生理和病理功能。外泌体的生物学功能主要取决于其内部成分，例如miRNA，lncRNA和蛋白质。目前已经证实外泌体传递的miRNA在外泌体细胞间通讯中起重要作用。最近的一项研究表明复发缓解型MS(RRMS)患者的外泌体miRNA表达异常。hsa-miR-122-5p，hsa-miR-196b-5p，hsa-miR-301a-3p和hsa-miR-532-5p的水平与RRMS严重程度密切相关。但是，尚未在NMOSD患者研究外泌体miRNA谱。若能找到对NMOSD具有潜在诊断价值的血清miRNA并根据这类miRNA设计针对于NMOSD的诊断试剂盒，将会推动我国NMOSD的诊治水平，也为将来对NMOSD的进一步研究提供思路。

发明内容

本发明的目的在于提供用于检测视神经脊髓炎的miRNA标志物及其应用。

本发明利用NGS以及基于qRT-PCR的方法，通过对大样本的NMOSD血清外泌体miRNA的研究，找到对NMOSD具有诊断价值的血清miRNA；并对这些miRNA在NMOSD血清外泌体中的表达进行验证，进一步明确其与NMOSD的关系；同时也研究了这些血清miRNA在预测患者病情严重程度中的作用。

因此，本发明的目的是提供miRNA标志物在制备视神经脊髓炎的诊断制剂中的应用，所述的miRNA标志物为hsa-miR-122-3p、hsa-miR-200a-5p中的至少一种。

优选，所述的应用，是检测血清外泌体样本中miRNA标志物的表达水平的试剂在制备视神经脊髓炎的诊断制剂中的应用。

优选，所述的应用，是采用测序技术、核酸杂交技术或核酸扩增技术检测样本中miRNA标志物的表达水平。